[发明专利]活细胞的冷冻保存

权利要求书

1.一种用于低温保存(基因修饰的)植物细胞、植物细胞器或植物组织的方法，其包括以下步骤：

-将所述植物细胞、植物细胞器或植物组织包封在包含一种或多种二氧化硅前体和一种或多种冷冻保护剂的多孔二氧化硅基质中；

-在4℃和20℃之间的温度下温育所获得的混合物超过1小时的时期；

-将所得到的杂化二氧化硅凝胶转移到在-30℃和-196℃之间的温度下的冷冻器中。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述冷冻器处于-80℃的温度。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述一种或多种冷冻保护剂选自由二甲基亚砜(DMSO)、糖、氨基酸、两性离子化合物(甜菜碱)、二醇、多元醇或其混合物所组成的组。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述糖是蔗糖或海藻糖。

5.根据权利要求3所述的方法，其中所述氨基酸是脯氨酸或甘氨酸。

6.根据权利要求3所述的方法，其中所述二醇是(聚)乙二醇。

7.根据权利要求3所述的方法，其中所述多元醇选自由山梨糖醇、麦芽糖醇、甘油、赤藻糖醇、木糖醇、阿拉伯糖醇、甘露醇、乳糖醇、异麦芽糖醇或其混合物所组成的组。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在所述二氧化硅基质中所述二氧化硅前体的浓度可以在5％和10％之间变化。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一种或多种二氧化硅前体选自由聚硅酸(H₂SiO₃)_n(优选偏硅酸H₂SiO₃)、氢氧化硅、二氧化硅烷氧化物(例如原硅酸四甲酯(TMOS)、原硅酸四乙酯(TEOS)、原硅酸四丙酯(TPOS)、四(2-羟乙基)原硅酸酯(EGMS)、四(2-羟丙基)原硅酸酯(PGMS)和四(2,3-二羟丙基)原硅酸酯(GLMS))、硅酸盐(如硅酸钠或硅酸钾)、二氧化硅纳米颗粒、山梨醇硅烷、有机改性硅酸盐(有机改性的二氧化硅)、三甲氧基甲基硅烷、二甲氧基二甲基硅烷、TMOS(四甲氧基硅烷)、DGS(二甘油基硅烷)，或其混合物所组成的组。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述冷冻保护剂为与所述一种或多种二氧化硅前体混合的浓度分别在0.2M和1.0M之间(蔗糖)以及1％和10％之间(DMSO)的蔗糖和DMSO。

11.一种用于植物细胞、植物细胞器或植物组织的低温保存试剂盒，包括一种或多种二氧化硅前体和一种或多种冷冻保护剂。

12.根据权利要求10所述的试剂盒，其中所述一种或多种二氧化硅前体选自由聚硅酸(H₂SiO₃)_n(优选偏硅酸H₂SiO₃)、氢氧化硅、二氧化硅烷氧化物(例如原硅酸四甲酯(TMOS)、原硅酸四乙酯(TEOS)、原硅酸四丙酯(TPOS)、四(2-羟乙基)原硅酸酯(EGMS)、四(2-羟丙基)原硅酸酯(PGMS)和四(2,3-二羟丙基)原硅酸酯(GLMS))、硅酸盐(如硅酸钠或硅酸钾)、二氧化硅纳米颗粒、山梨醇硅烷、有机改性硅酸盐(ormosils)(有机改性的二氧化硅)、三甲氧基甲基硅烷、二甲氧基二甲基硅烷、TMOS(四甲氧基硅烷)、DGS(二甘油基硅烷)，或其混合物所组成的组。

13.根据权利要求10所述的试剂盒，其中所述一种或多种冷冻保护剂选自由DMSO(二甲基亚砜)、糖、氨基酸、两性离子化合物(甜菜碱)、二醇或多元醇或其混合物所组成的组。

14.根据权利要求12所述的试剂盒，其中所述糖是蔗糖或海藻糖。

15.根据权利要求12所述的试剂盒，其中所述氨基酸为脯氨酸或甘氨酸。

16.根据权利要求12所述的试剂盒，其中所述二醇是(聚)乙二醇。

17.根据权利要求12所述的试剂盒，其中所述多元醇选自由山梨糖醇、麦芽糖醇、甘油、赤藻糖醇、木糖醇、阿拉伯糖醇、甘露醇、乳糖醇、异麦芽糖醇或其混合物所组成的组。