[发明专利]多重甲基化-特异性扩增系统和方法

权利要求书

1.一种方法，包括：

a)用甲基化-特异性检测试剂处理靶核酸；

b)同时扩增所述靶核酸内的多个核酸片段以产生多个扩增子；和

c)检测所述多个扩增子。

2.权利要求1的方法，其中所述靶为基因的启动子区域。

3.权利要求1的方法，其中所述甲基化特异性试剂为亚硫酸氢盐。

4.权利要求1的方法，其中所述同时扩增在单个反应容器中进行。

5.权利要求1的方法，其中所述核酸靶富含GC。

6.权利要求5的方法，其中所述核酸靶包含CpG岛。

7.权利要求3的方法，其中亚硫酸氢盐与未甲基化的胞嘧啶残基反应，将其转化为尿嘧啶残基。

8.权利要求3的方法，其中亚硫酸氢盐不与甲基化的胞嘧啶残基反应，使其保持为5-甲基胞嘧啶。

9.权利要求1的方法，其中所述扩增为PCR。

10.权利要求1的方法，其中所述检测包括使所述扩增子与多个核酸探针接触。

11.权利要求10的方法，其中所述核酸探针包含可检测的标记。

12.权利要求11的方法，其中所述多个核酸探针包含相同的标记。

13.权利要求11或12的方法，其中所述标记为荧光标记。

14.权利要求4-13中任一项的方法，其中所述扩增和检测包括实时PCR扩增和检测。

15.权利要求1的方法，其中所述检测包括选自质谱分析、测序和杂交的核酸检测技术。

16.权利要求1-15中任一项的方法，其中所述多个扩增子包括至少5个扩增子。

17.权利要求1-15中任一项的方法，其中所述多个扩增子包括至少10个扩增子。

18.扩增核酸的方法，包括：

a)同时扩增已经用甲基化-特异性检测试剂处理的靶核酸内的多个核酸片段以产生多个扩增子；和

b)检测所述扩增子。

19.一种方法，包括：

a)用甲基化-特异性检测试剂处理靶核酸；

b)同时扩增所述靶核酸内的多个核酸片段以产生多个扩增子；和

c)使所述扩增子与多个核酸探针接触以检测所述多个扩增子。

20.一种试剂盒，包含：

a)用于扩增靶核酸的多个引物对；

b)与通过所述多个引物对扩增的扩增子特异性结合的多个核酸探针；和

c)甲基化特异性检测试剂。

21.权利要求20的试剂盒，其中所述探针包含可检测的标记。

22.权利要求21的试剂盒，其中所述探针包含相同的标记。

23.权利要求20或21的试剂盒，其中所述标记为荧光标记。

24.权利要求18的试剂盒，其中所述甲基化特异性试剂为亚硫酸氢盐。