[发明专利]检测供体特异性抗体的方法和用于实施所述方法的系统

说明书

提供了用于测定供体特异性抗体在生物样本中的存在或不存在的方法。所述方法包括在足以使受体免疫抗体(如果存在的话)结合供体细胞表面抗原(Ag)的条件下将来自供体的细胞样本与来自受体的生物样本接触以形成免疫抗体‑Ag复合物，将所述混合物与在其表面上包含特异性结合免疫抗体‑Ag复合物(例如，Ag或免疫抗体)的抗体的珠粒接触，在裂解条件下添加特异性结合结合于珠粒的免疫抗体‑Ag复合物的可检测地标记的抗体，和检测结合于免疫抗体‑Ag复合物的可检测地标记的抗体的存在或不存在以测定供体特异性抗体在受体的生物样本中的存在或不存在。还提供了用于实施主题方法的系统和试剂盒。

相关申请的交叉引用

本申请要求对2013年3月14提交的美国临时专利申请系列第61/782,003号(其公开内容通过引用整体并入本文)的提交日期的优先权。

背景

每年世界上进行100,000多例实体器官移植，包括每年在美国进行的数万例移植。尽管在免疫抑制和移植后护理方面取决了显著的改善，但长期的移植物功能不太理想。在美国，死亡和活供体的肾移植物的经调整的10年异体移植物存活率分别仅为约40％和60％。继发于抗体介导的排斥(AMR)的早期和晚期移植失败是低移植物存活率的重要原因。

针对人白细胞抗原(HLA)的抗体是存在于移植候选者或受体的血液中的循环抗体，其为较早致敏事件(输血、先前的移植或妊娠)的结果。移植前存在的供体特异性抗体(DSA)可引起超急性排斥和立即移植物失功，并且可通过移植前交叉配血来评估。在最近几年，监测针对供体特异性HLA-I类和II类错配的临床相关抗体的移植后发生的概念一直是移植界内关注的重要领域。无论在移植前还是移植后检测，当未进行临床治疗时，针对在供体器官上表达的抗原的抗体的存在都导致对移植器官的免疫攻击，并且增加移植物失功和/或排斥的风险。DSA攻击，除其它以外，异体移植物的内皮，并且可导致随后活组织检查证明的AMR以及需要增强的免疫抑制的急性损伤。DSA发展的进展和相应的临床事件一起损害异体移植物，从而随着时间的推移导致慢性改变，最终削弱移植物功能和存活。

抗体介导的排斥可表现为因记忆应答或从头抗原体产生而导致的早期急性过程，或表现为因从头抗体产生而引起的晚期和慢性过程。在急性期中，通常预先形成导致早期急性排斥的抗体，但从头DSA也可在早期移植后期间发生，从而导致急性排斥。具有预先形成的DSA的患者处于显著更大的患有急性AMR的风险中，并且具有显著更低的移植物存活率。

慢性排应是移植肾失功能(death-censored graft loss)的主要原因之一。同种抗体介导的损伤和修复的反复循环导致异体移植物的微血管系统的显著变化。具有预先形成的DSA的患者和从头发生DSA的患者处于增加的患有慢性排斥的风险中。

概述

提供了用于测定供体特异性抗体在生物样本中的存在或不存在的方法。所述方法包括通过在足以使受体免疫抗体(如果存在的话)结合供体细胞表面抗原(Ag)的条件下将来自供体的细胞样本与来自受体的生物样本组合来形成混合物以形成免疫抗体-Ag复合物，将所述混合物与在其表面上包含特异性结合免疫抗体-Ag复合物(例如，Ag或免疫抗原)的珠粒混合，在裂解条件下添加特异性结合结合于珠粒的免疫抗体-Ag复合物的可检测地标记的抗体，和检测结合于免疫抗体-Ag复合物的可检测地标记的抗体的存在或不存在，以测定供体特异性抗体在来自受体的生物样本中的存在或不存在。还提供了用于实施主题方法的系统和试剂盒。

附图简述

当结合附图阅读时，可根据下列详细描述最好地理解本发明。包括在附图中的是下列图：

图1示意性举例说明用于据本公开内容的一个实施方案测定供体特异性抗体在生物样本中的存在或不存在的方法。

图2示意性举例说明用于根据本公开内容的第二实施方案测定供体特异性抗体在生物样本中的存在或不存在的方法。