[发明专利]用于稳定包封有活性成分之红细胞的悬浮液的方法、所获得的悬浮液

权利要求书

1.用于由掺入活性成分的经重密封红细胞(RBC)获得包封有所述活性成分之RBC的稳定化悬浮液的方法，所述方法包括将所述经重密封RBC在孵育溶液中孵育30分钟或更长的时间，所述溶液包含葡萄糖和NaCl水溶液，其以一定的浓度使用来获得不低于280mOsmol/kg的期望的渗量浓度，所述孵育溶液是不包含使RBC膜变性之桥连或交联试剂的溶液，然后从经孵育悬浮液中除去液体介质并将所获得的RBC悬浮置于允许所述悬浮液被注射到患者中的溶液中。

2.权利要求1所述的方法，其包括：在孵育之前，通过裂解-重密封将所述活性成分包封到RBC中和获得包含所述活性成分的经重密封RBC；其中所述活性成分选自L-天冬酰胺酶、六磷酸肌醇、精氨酸脱亚胺酶、因子VIII、因子IX、阿葡糖苷酶、β-葡糖苷酶、二膦酸盐类、尿酸酶、胸苷磷酸化酶和腺苷脱氨酶。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述孵育在280mOsmol/kg至380mOsmol/kg的渗量浓度下进行。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述孵育在290mOsmol/kg至330mOsmol/kg的渗量浓度下进行。

5.权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述孵育的持续时间为1小时或更长。

6.权利要求1至4中任一项所述的方法，其还包括在所述孵育之前对所述经重密封RBC进行清洗。

7.权利要求6所述的方法，其中清洗包括至少一个清洗循环，所述清洗循环包括将所述经重密封RBC在渗量浓度不低于280mOsmol/kg的溶液中进行稀释或者悬浮置于所述溶液中，然后进行分离。

8.权利要求7所述的方法，其中清洗包括2或3个清洗循环。

9.根据权利要求1所述的方法，其包括以下步骤：

(a)将活性成分包封在RBC内，其包括与低渗介质接触，与所述活性成分接触，使所述RBC重密封；

(b)获得包含掺入所述活性成分的RBC和渗量浓度为280mOsmol/kg或更高的溶液的悬浮液或残留物；

(c)将步骤(b)的残留物或悬浮液原样或者在添加渗量浓度为280mOsmol/kg或更高的孵育溶液之后孵育30分钟或更长的时间；

(d)从在步骤(c)中孵育的悬浮液中除去液体介质；

(e)将在(d)中获得的RBC悬浮置于允许所述悬浮液被注射到患者中的溶液中。

10.根据权利要求9所述的方法，其中步骤(b)包括至少1个清洗循环，所述清洗循环通过将在(a)中获得的悬浮液或残留物在渗量浓度为280mOsmol/kg或更高的溶液中进行稀释，然后获得RBC的残留物或悬浮液。

11.根据权利要求9至10中任一项所述的方法，其中在步骤(d)中，进行分离或者在稀释之后进行分离。

12.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中孵育步骤在2℃至39℃的温度下进行。

13.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中：

-孵育步骤在2℃至10℃的低温下进行并且持续1小时至72小时；或者

-孵育步骤在20℃至39℃的温度下进行并且持续30分钟至1小时。

14.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其包括在2℃至8℃的温度下在悬浮置于保存液中之后72小时时回收稳定化RBC悬浮液，所述稳定化RBC悬浮液的细胞外血红蛋白水平维持在0.5g/dl或更低，和/或溶血率维持在2％或更低。

15.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其包括回收稳定化RBC悬浮液，所述稳定化RBC悬浮液的细胞外血红蛋白水平维持在0.2g/dl或更低。