[发明专利]个性化的高纯度肝细胞癌干细胞、所述干细胞的方法和用途

说明书

相关申请的交叉参考

本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2013年3月7日提交的美国临时专利申请61/774,517的权益。本申请也是2013年8月6日提交的国际申请PCT/US2013/053850的部分继续申请，所述国际申请根据35U.S.C.§119(e)要求2012年8月15日提交的美国临时专利申请61/683,477和2012年10月25日提交的美国临时专利申请61/718,643的权益。所述申请的全部内容以引用的方式并入本文中。

技术领域

本发明涉及肝细胞癌干细胞、源自所述干细胞的免疫原性组合物以及制造和使用所述干细胞的方法。

背景技术

在实体肿瘤中，较小百分比的细胞具有作为亲本肿瘤引发具有相同组织学异质性的肿瘤的能力。这些细胞被称为癌症干细胞，并且也被称为肿瘤起始细胞或癌症起始细胞。癌症干细胞可以由一组特性来定义。首先，其具有使自身再生的能力。第二，其在移植时能够建立新肿瘤。第三，其可以被表征为休眠或缓慢循环（细胞周期）的肿瘤细胞。第四，其可能是造成肿瘤对化学疗法或放射疗法的抵抗性的原因。第五，其取决于维持其再生并且产生更分化祖细胞的能力的特定微环境，其中所述环境维持癌症干细胞的未分化状态。这种微环境可以包括间充质细胞干细胞、组织相关联的成纤维细胞以及内皮细胞。在体外培养的情况下形成球状体的能力是可以有助于将特定细胞识别为癌症干细胞的又一个特征。癌症干细胞的一个非限制性定义是能够再生亲本肿瘤的完整异质性并且即使在多次传代之后也连续地生长的细胞。

特定癌症干细胞群体可能是赘瘤来源，并且可能是已经治疗的癌症复发的来源。另外，癌症干细胞在组织中的亚群当暴露于某些信号中时可能重新启动生长周期并且产生可以重建肿瘤的细胞。癌症干细胞的小环境是休眠的，直到正确的信号传导触发再进入增殖周期。再进入信号可以来源于局部事件，如外伤、细胞损伤、微生物攻击（病毒、细菌或真菌），或由局部生长因子、细胞因子或细胞间通信来介导。另外，激素可以调节组织特异性小环境中的干细胞。干细胞小环境的缺陷或突变可能导致上文功能的扰动。赘瘤可能由这类扰动产生，并且这些扰动包括影响对细胞周期的控制的随机突变。导致癌症的突变在个体之间变化。在患有一种类型的癌症的那些人之间（如一个乳腺癌患者对比另一个乳腺癌患者）以及在不同类型的癌症之间（如肝癌对比黑色素瘤）观察到这类变化性。

针对癌症发展出的疗法包括涉及自体免疫反应的方法。这些方法包括使用新鲜采集的自体肿瘤细胞，所述自体肿瘤细胞解聚并调配成疫苗载体。另一种方法是树突状细胞疫苗，其中树突状细胞用自体肿瘤裂解物脉冲。又一种方法是用半乳糖聚合物对患者的肿瘤细胞进行体外修饰，并且将经修饰的肿瘤细胞注射回到所述患者中，其中半乳糖标记的肿瘤细胞更容易由抗原呈递细胞（APC）吸收，由此增加抗肿瘤反应。这些涉及自体免疫疗法的方法中的缺点是当使用块状肿瘤或块状肿瘤抗原作为免疫刺激剂时的低的抗原信噪比。大部分肿瘤细胞是相当分化的并且与正常细胞如血管成分、结缔组织、分化的肿瘤细胞、非活细胞和坏死细胞以及正常宿主组织混合。癌症干细胞仅代表肿瘤块的较小部分，在更具攻击性的肿瘤中有时最多4%，最常见小于1%。因此，当使用块状肿瘤作为抗原来源时，免疫反应是针对更分化的细胞，从而允许干细胞逃避攻击并且可能造成肿瘤的复发或转移。

另一种新疗法是针对在癌症中更丰富地表达的正常抗原的单一靶向抗体。特异性抗原靶向疗法（如抗CD133、抗EpCAM、抗CD44、抗CD13等）是无辨别力的，并且影响正常细胞以及癌细胞，从而引起对患者的巨大不良作用。

发明内容

本文公开肝细胞癌（HCC）癌症干细胞（CSC）、HCC-CSC细胞系以及用于治疗肝细胞癌的包含HCC-CSC负载型树突状细胞的免疫原性组合物。