[发明专利]肽聚糖的生物学测定有效

申请号：	201480018300.0	申请日：	2014-03-25
公开（公告）号：	CN105122059B	公开（公告）日：	2019-04-30
发明（设计）人：	皮埃尔·拉诺;马克·比盖特;罗塞利纳·伯纳德;法布里斯·阿兰;马蒂厄·卡庞捷;安纳斯·丹伊斯;赫拉·海新纳-伽尔比	申请（专利权）人：	罗盖特兄弟公司
主分类号：	G01N33/50	分类号：	G01N33/50
代理公司：	中原信达知识产权代理有限责任公司 11219	代理人：	金海霞;杨青
地址：	法国莱***	国省代码：	法国;FR
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摘要：
搜索关键词：	肽聚糖生物学测定
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【权利要求书】：

1.一种测定艾考糊精或麦芽糖糊精样品中的肽聚糖(PGN)的方法，该方法包含：

a)通过声处理、加热和/或碱性化处理该样品；

b)使处理后的样品或其稀释物与重组细胞接触，该重组细胞表达外源TLR2受体(Toll样受体2)和直接依赖与该TLR2受体相关的信号传导路径的报道基因，所述报道基因编码有色或荧光蛋白质或编码其活性可用或不用底物来测量的蛋白质；

c)测量该报道基因信号；和

d)使用PGN的量与该报道基因信号的强度之间的对应性的校正曲线来确定该样品中的PGN的量，其中所述PGN的量与该报道基因信号强度之间的对应性的校正曲线是用PAM₃Cys-Ser-(Lys)4三盐酸盐校正，以按活性PGN的当量单位来表示PGN的量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于通过声处理、加热和/或碱性化处理该样品使得能够破碎并分解该样品中所含的PGN，以使得其能活化该TLR2受体。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于处理该样品使得能够生成主要具有约120kDa大小的PGN。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于该报道基因是分泌的碱性磷酸酶。

5.根据权利要求1述的方法，其特征在于该细胞是HEK-Blue^TM hTLR2细胞系的细胞。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于活性PGN的当量单位的量与该报道基因信号强度之间的对应性的校正曲线是用源自选自以下的细菌的PGN来制备：金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、枯草杆菌(Bacillussubtilis)和酸热脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillus acidocaldarius)。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于活性PGN的当量单位的量与该报道基因信号强度之间的对应性的校正曲线是用源自选自以下的细菌的PGN来制备：金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌和酸热脂环酸芽孢杆菌。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于该方法包含使用源自选自以下的细菌的PGN制备该校正曲线的预备步骤：金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、枯草杆菌和酸热脂环酸芽孢杆菌。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于该方法包含使用PAM₃Cys-Ser-(Lys)4三盐酸盐制备校正曲线的预备步骤。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于如果需要，稀释该样品，以生成对应于该校正曲线的线性部分的报道基因信号。

11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于该样品是艾考糊精溶液的样品。

12.一种用于测定葡萄糖聚合物样品中的肽聚糖(PGN)的试剂盒，该试剂盒包含：

重组细胞，其表达外源TLR2受体(Toll样受体2)和直接依赖与该TLR2受体相关的信号传导路径的报道基因，所述报道基因编码有色或荧光蛋白质或编码其活性可用或不用底物来测量的蛋白质；和

PGN标准品；

用于预处理该样品的溶液，

任选地使用说明，

该试剂盒还包含PAM₃Cys-Ser-(Lys)4三盐酸盐。

13.根据权利要求12所述的试剂盒，其特征在于所述PGN标准品源自选自以下的细菌：金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、枯草杆菌和酸热脂环酸芽孢杆菌。