[发明专利]针对卵母细胞能力的标志物基因

说明书

发明领域

卵丘细胞(CC)基因表达正作为用以选择具有最高妊娠机会的胚胎的形态学评分的另外方法进行探究。本发明涉及鉴定用于评估哺乳动物卵母细胞在受精后产生可存能存活的妊娠的能力的生物标志物基因的新型方法，其基于使用活产和胚胎发育作为在潜在生物标志物基因的外显子水平分析中将使用的卵母细胞的终点标准。本发明进一步提供了由此鉴定的CC表达的生物标志物基因，以及基于使用本发明的方法鉴定的生物标志物基因的预后模型。

发明背景

单胚胎移植(SET)是限制ART后的多胎妊娠的优选处理。为了不危及带回家婴儿率，用于第一周期中的移植的胚胎的选择变得更加重要。紧跟着基于形态学的现有标准，目前其它方法正处于研究中。在生长和成熟期间与卵母细胞紧密接触的卵丘细胞(CC)中定量基因表达测量的使用似乎是有希望的方法(Huang和Wells2010)。自从关于CC表达可能与胚胎发育相关的主题的研究首次公开以后(McKenzie等人2004)，其它几项研究已探究了这种可能性，并尝试使CC表达与不同终点关联。所探究的终点的例子是：胚胎发育(Anderson等人2009；Cillo等人2007；Feuerstein等人2007；Hasegawa等人2005；vanMontfoort等人2008；Zhang等人2005)、卵母细胞的非整倍性阶段(Fragouli等人2012b)、卵母细胞核成熟阶段(Ouandaogo等人2011)以及从患者角度来看可能最重要的：妊娠结局(Assidi等人2011；Assou等人2008；Gebhardt等人2011；Wathlet等人2012；Wathlet等人2011)。不同研究之间的结果的确认在CC基因表达的分析中似乎并不明显。在目前的文献中，未发现许多在不同研究中共同的基因。例如，在两项研究中透明质酸合酶2(HAS2)在质量良好的胚胎中相比低胚胎形态表达更高(Cillo等人2007；McKenzie等人2004)，但在其它两项研究中可不与胚胎形态相关(Anderson等人2009；Gebhardt等人2011)。不一致性可以是由于不同实验设计、使用不同终点引起的，但基因表达可受已知因素例如患者的刺激方案(Adriaenssens等人2009；Adriaenssens等人2010；Grondahl等人2009)或仍未评估的因素例如在不同IVF实验室中使用的培养基的影响。

在本研究中，使用定量实时聚合酶链反应(QPCR)回顾性分析来自47个胞质内精子注射(ICSI)患者的47个个体卵丘复合物。通过使用目前的样品集，对来自先前研究(Wathlet等人2012)的妊娠预测模型就其预测力进行了验证。在下一步中，在寻找具有更强预测力的新基因的尝试中，通过考虑之前描述的3种基因(肝配蛋白-B2(EFNB2)、钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶ID(CAMK1D)、斯钙素1(STC1))和多种新型基因以及所述基因的剪接变体，在数学模型中构建了新的多参数模型以预测卵母细胞能力(参见表)。

我们的患者样品集实现了之前从未在文献中报道过的分析：分析了来自在新移植周期中不导致妊娠的卵母细胞的CC和来自在冷冻胚胎移植(FRET)周期后导致妊娠的其同胞卵母细胞的CC(患者内分析)。就我们所知，这是比较来自如会在最终临床应用中完成的SET背景下相同回收周期的妊娠和非妊娠CC的首个研究。

附图简述

图1：在本研究中使用的样品的概述

本图代表用于本研究中执行的不同分析的样品的分布。灰色背景域限定用于特异度分析的样品，其在域的左侧上标记。SET：单胚胎移植；FRET冷冻胚胎移植周期；rFSH：重组促卵泡激素。^a：(Wathlet等人2012)。

A：妊娠分析(患者间)

-来自早期研究^a的妊娠模型的验证(EFNB2、CAMK1D和STC1)

-t检验分析妊娠相对于非妊娠

-用新的基因构建新的妊娠模型

B：妊娠分析(患者内)

-配对t检验妊娠相对于非妊娠

-测试在患者间分析中发现的多参数模型

图2：非妊娠相对于活产相关卵丘细胞样品的标准化基因表达值的t检验。