[发明专利]针对卵母细胞能力的标志物基因

权利要求书

1.用于检测生物标志物基因或其剪接变体的方法，所述生物标志物基因或其剪接变体用于评估哺乳动物卵母细胞导致分娩、植入、形成植入前胚泡或胚胎和/或导致受精的能力；所述方法包括：

-使用活产和胚胎发育作为待使用的卵母细胞的选择终点；

-在样品中进行基因表达的外显子水平分析，所述样品包含与所述卵母细胞联合的至少一个颗粒细胞或卵丘细胞；

-进行基因表达的所述外显子水平分析的基于患者内的比较；和

-对于评估哺乳动物卵母细胞导致分娩、植入、形成植入前胚泡或胚胎和/或导致受精的能力的生物标志物基因，仅将在配对t检验中的p值<0.05视为显著的。

2.根据权利要求1的方法，其中在包含表13的基因的实验上执行基因表达的所述外显子水平分析。

3.用于在实验中使用来自卵母细胞的卵丘细胞基因表达来检测基因或剪接变体的生物标志物基因组合模型的方法，其包括：

a.使用权利要求1或2的方法检测至少2种生物标志物基因；

b.使用双尾t检验来比较导致妊娠或非妊娠的所述至少2种生物标志物基因的卵丘生物标志物基因表达组合，并且保留具有I型p<0.05的截断值的所述至少2种生物标志物基因的组合作为模型，来预测哺乳动物卵母细胞在能够活产或者用于评估胚胎或胚细胞体外发育的能力；

c.进行逐步多参数回归分析，以确定所述至少2种生物标志物的剪接变体是否具有III型p值<0,3，并将所述剪接变体加入步骤b中保留的模型；和

d.测定包含步骤c的剪接变体的模型的总体p值，并且当所述总体p值进一步降低时，将所述剪接变体保留在所述模型中。

4.用于评估哺乳动物卵母细胞导致分娩、植入、形成植入前胚泡或胚胎和/或导致受精的能力的体外方法；所述方法包括下述步骤：

-在包含与卵母细胞联合的至少一个颗粒细胞或卵丘细胞的样品中，测定使用权利要求1或2的方法鉴定的生物标志物基因表达水平；或使用权利要求3的方法鉴定的生物标志物组合的生物标志物基因表达水平；和

-基于所述表达水平，评估所述卵母细胞导致分娩、植入、形成植入前胚泡或胚胎和/或导致受精的能力。

5.根据权利要求2或4的体外方法，其中对选自CAMK1D、PTGS2、EFNB2、VCAN、STC1、STC2、PGR和GPX3的基因的剪接变体执行基因表达的外显子水平分析。

6.根据权利要求4的体外方法；其中所述一种或多种生物标志物基因选自SASH1、MROH9、NCOA7、DNAH3、HSPH1外显子2、HSPH1外显子6、GALNTL6、SPTBN5、CAMK1D外显子1、CAMK1D外显子9和EFNB2。

7.根据权利要求4的体外方法，其中所述生物标志物的组合选自包含下列的列表：

●EFNB2和NCOA7；

●CAMK1D外显子9和HSPH1外显子2和NCOA7

●CAMK1D外显子9和HSPH1外显子6和NCOA7

●CAMK1D外显子1和SASH1；和

●EFBN2和SASH1。

8.用于评估哺乳动物卵母细胞导致分娩、植入、形成植入前胚泡或胚胎和/或导致受精的能力的体外方法；所述方法包括下述步骤：

-在包含与卵母细胞联合的至少一个颗粒细胞或卵丘细胞的样品中，与选自表13中列出的基因的一种或多种基因组合地；特别与选自表8中列出的基因的一种或多种另外基因组合地；特别与选自HSPH1外显子2、HSPH1外显子6、NCOA7和SASH1的一种或多种另外基因组合地，测定CAMK1D外显子1、CAMK1D外显子9或EFNB2的外显子水平基因表达；和

-基于所述表达水平，评估所述卵母细胞导致分娩、植入、形成植入前胚泡或胚胎和/或导致受精的能力。

9.根据权利要求1-8中任一项的体外方法，其进一步包括使所述基因的外显子水平基因表达标准化的步骤。

10.根据权利要求1-8中任一项的体外方法，其中测定所述一种或多种生物标志物基因的标志物基因表达水平包括借助于使用引物和/或探针的生物测定法来测量所述基因的多核苷酸水平，所述引物和/或探针能够与所述多核苷酸或者所述多核苷酸内的一个或多个区域特异性杂交。