[发明专利]鹅膏毒肽衍生物

说明书

本发明涉及肿瘤的治疗。一方面，本发明涉及鹅膏毒肽和靶结合基团例如抗体通过特定接头连接的共轭物，其可用于治疗癌症和其它病症和疾病。另一方面，本发明涉及包括所述共轭物的药物组合物。

技术领域

本发明涉及肿瘤治疗。一方面，本发明涉及鹅膏毒肽和靶结合基团例如抗体通过特定接头连接的共轭物，用于治疗癌症和其他病症及疾病。另一方面，本发明涉及包括所述共轭物的药物组合物。

背景技术

鹅膏毒肽是8个氨基酸组成的环肽。例如，它们可以从鹅膏蕈蘑菇分离或合成制备。鹅膏毒肽特异性地抑制哺乳动物细胞的DNA依赖性RNA聚合酶II，从而抑制受影响的细胞的转录和蛋白质的生物合成。细胞的转录抑制导致生长和增殖的停止。虽然不是共价连接，鹅膏毒肽和RNA聚合酶II能够紧密的连接(KD＝3nM)。因为从酶鹅膏蕈碱的解离是一个非常缓慢的过程，所以受影响的细胞恢复的可能性不大。当转录的抑制时间过长，细胞将经历程序性细胞死亡(凋亡)。

在1981年,通过使用连接到色氨酸的吲哚环的接头(氨基酸4；参见图1),经重氮化,连接抗Thy1.2抗体到α-鹅膏蕈,已经探讨了用鹅膏毒肽作为细胞毒性基团用于肿瘤治疗(Davis & Preston,Science 1981,213,1385-1388)。Davis和Preston确定连接位点7’。Morris和Venton证明位点7’的替代导致保持细胞毒性的衍生(Morris & Venton,Int.J.Peptide Protein Res 1983,21 419-430)。

专利申请EP1859811 A1(2007年11月28日公布)中描述的共轭物，其中，β鹅膏蕈碱的鹅膏毒肽氨基酸1的γC-原子直接，即不通过接头结构，连接到白蛋白或单克隆抗体HEA125，OKT3，或PA-1。此外，示出了这些共轭物对乳腺癌细胞(MCF-7)、Burkitt淋巴瘤细胞(Raji细胞)和T-淋巴瘤细胞(Jurkat细胞)增殖的抑制效果。其提示了接头的使用，包括这样的接头，所述接头包括例如酰胺，酯，醚，硫醚，二硫化物，脲，硫脲，烃基等元素，但其没有实际示出这样的构建体，也没有提供更多的细节，如鹅膏毒肽的附着位点。

专利申请WO 2010/115629和WO 2010/115630(均2010年10月14日公布)描述的共轭物，其中抗体，如抗EpCAM抗体诸如人源化huHEA125，通过(i)所述鹅膏毒肽氨基酸1的γC-原子(ii)所述鹅膏毒肽氨基酸4的6’C-原子，或(iii)通过δC原子鹅膏毒肽氨基酸3的δC-原子连接到鹅膏毒肽，在每一种情况下可以直接或通过抗体和鹅膏毒肽之间的接头连接。提示的接头包含例如酯，醚，氨基甲酸酯，肽键等元素。此外，示出了这些共轭物对乳腺癌细胞(细胞系MCF-7)，胰癌(细胞系CAPAN-1)，结肠癌(细胞系的Colo205)和胆管癌(细胞系OZ)增殖的抑制作用。

Wieland审查了鹅膏毒肽的构效关系(T.Wieland,Peptides of PoisonousAmanita Mushrooms,Springer series in molecular biology,Springer Verlag NewYork,1986)。假定氨基酸2的羟基基团(羟基脯氨酸)和氨基酸3所述-羟基基团(二羟基-异亮氨酸)为活性所必需，而在氨基酸1(天冬氨酸或天冬酰胺)、氨基酸4(6-羟基色氨酸)的功能基团和氨基酸3的-羟基基团更耐受化学修饰。这表明，后者是接头附着的首选位点，而应避免前者的修饰。

已知的是，当连接到大生物分子的载体时,鹅膏毒肽是相对无毒的，，如抗体分子,而且它们只有在切掉生物分子载体后才发挥它们的细胞毒性。鉴于鹅膏毒肽的毒性，特别是对肝细胞，最为重要的是,对用于靶向肿瘤治疗的该鹅膏毒肽共轭物施用等离子体后,它保持高度稳定，并且在靶细胞内化后发生鹅膏毒肽的释放。在这种情况下，共轭稳定的微小改进可对治疗窗和鹅膏毒肽共轭物治疗方法的安全性产生严重的影响。

发明目的