[发明专利]生产腺病毒的方法在审
申请号: | 201480010880.9 | 申请日: | 2014-02-28 |
公开(公告)号: | CN105189739A | 公开(公告)日: | 2015-12-23 |
发明(设计)人: | 凯丽·费希尔;吉滕德拉·巴蒂亚;布赖恩·罗伯特·尚皮翁 | 申请(专利权)人: | 普赛奥克苏斯治疗公司 |
主分类号: | C12N7/01 | 分类号: | C12N7/01;C12N7/02 |
代理公司: | 北京奥文知识产权代理事务所(普通合伙) 11534 | 代理人: | 张文;阴亮 |
地址: | 英国*** | 国省代码: | 英国;GB |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 生产 病毒 方法 | ||
1.制造具有包含E2B区的基因组的嵌合型溶瘤腺病毒的方法,其中所述E2B区包含衍生自第一种腺病毒血清型的核酸序列和衍生自第二种不同的腺病毒血清型的核酸序列;其中所述第一种和第二种血清型各自选自腺病毒亚群B、C、D、E或F,其中所述方法包括以下步骤:
a.在适合于供养细胞的培养基存在下,培养用所述腺病毒感染的哺乳动物细胞使得所述病毒复制,其中所述细胞能够支持病毒复制,以及
b.在培养期结束时,通过过滤从步骤a)的培养基中分离所述病毒,其中所述病毒的分离不在细胞裂解步骤之后。
2.如权利要求1所述的方法,其中所述病毒具有来自B群腺病毒例如Ad11的六邻体和纤突,并且特别是其中所述病毒选自ColoAd1群。
3.如权利要求1或2所述的方法,其中所述病毒为复制型。
4.如权利要求1至3中任一权利要求所述的方法,其中所述培养期为30至100小时,例如35至70小时。
5.如权利要求1至4中任一权利要求所述的方法,其中所述培养包括灌流培养步骤、补料批式培养、批式培养,特别是灌流培养步骤。
6.如权利要求1至5中任一权利要求所述的方法,其中所述细胞以贴壁或悬浮培养生长,特别是悬浮培养。
7.如权利要求1至6中任一权利要求所述的方法,其中所述哺乳动物细胞选自HEK、CHO、HeLa、Viro、PerC6和GMK,特别是HEK293。
8.如权利要求1至7中任一权利要求所述的方法,其中所述培养为5L或更大的规模。
9.如权利要求1至8中任一权利要求所述的方法,其中所述病毒在培养期间的浓度为40至150ppc,例如50至100ppc。
10.如权利要求1至9中任一权利要求所述的方法,其中用初始浓度为1-9×104vp/ml或更大,例如1-9×105vp/ml,1-9×106vp/ml,1-9×107vp/ml,1-9×108vp/ml,1-9×109vp/ml,特别是4×106vp/ml至5×106vp/ml的病毒感染所述细胞。
11.如权利要求1至10中任一权利要求所述的方法,所述方法提供了一部分溶瘤病毒,其中所述方法包括进一步的步骤,使得通过不同方法同样制备的第二部分溶瘤病毒与第一部分相组合。
12.如权利要求1至11中任一权利要求所述的方法,其中所述方法为GMP制造方法。
13.如权利要求1至12中任一权利要求所述的方法,其中所述过滤器为切向过滤器。
14.如权利要求1至13中任一权利要求所述的方法,其中所述方法还包括纯化步骤,其选自CsCl梯度法,色谱法步骤,例如离子交换色谱法,特别是阴离子交换色谱法,以及它们的组合。
15.如权利要求1至14中任一权利要求所述的方法,其中所述总病毒的40%至93%可从培养基回收。
16.如权利要求1至15中任一权利要求所述的方法,其还包括在适合于保存的缓冲液中配制所述病毒。
17.由权利要求1至16中任一权利要求所述的方法获得的病毒或制剂或者可获自权利要求1至16中任一权利要求所述的方法的病毒或制剂。
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