[发明专利]用于递送MRNA编码的抗体的方法和组合物

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2013年3月14日提交的美国临时专利申请序列No.61/784,903和2013年12月23日提交的美国临时专利申请序列No.61/920,165的优先权，其内容在此通过引用整体并入。

背景

已知抗体具有强大的治疗效果，并且目前用于治疗一系列疾病，包括癌症、自身免疫性疾病、心血管疾病和移植排斥。传统上，治疗性抗体是通过重组技术进行生产，配制，然后向需要抗体治疗的患者施用。然而，抗体生产和配制非常昂贵。此外，许多抗体仅具有非常短的体内半衰期，因此在被降解之前可能达不到它们的靶抗原或靶组织。为了达到期望的功效，抗体治疗通常需要高剂量和频繁的施用。

基因疗法和基因疫苗接种(也称为DNA疫苗接种)提供用于体内递送大量抗体的替代方法。但是，DNA作为基因治疗和基因疫苗接种中的药物的用途可能造成一些安全问题。例如，DNA在血流中被缓慢地降解。可能发生抗-DNA抗体的形成(Gilkeson等，J.Clin.Invest.1995,95:1398-1402)。因此(异源)DNA在生物体中的可能持续存在可导致免疫系统的超活化(hyperactivation)，已知在小鼠中导致脾大(Montheith等，AnticancerDrugRes.1997,12(5):421-432)。此外，DNA整合可以通过断裂完整基因造成宿主基因组中的突变。

发明概述

本发明提供一种基于信使RNA(mRNA)递送技术用于体内更安全并且更有效地递送抗体的改进的方法。本发明部分地基于该意外发现：通过递送编码抗体的重链和轻链的外源性mRNA，即使在该重链和轻链是通过独立的mRNA递送时，也可以在体内完成完全组装的多链抗体的产生。如以下在实施例部分中所述的非限制性实施例所示，当将包囊在脂质体中的编码重链和轻链的mRNA构建体静脉内注入小鼠时，在注射后6小时内，在小鼠血清中，可以检测到显著量的期望的mRNA编码的抗体，且在72或96小时后出现峰值。甚至在注射后的三周后抗体的全身性表达持续存在。因此，本发明人已成功地证明多链治疗性抗体可以通过mRNA递送并由患者身体自身产生，这使得消除非常昂贵的重组抗体生产工艺成为可能。此外，与mRNA的短暂且易损的性质相反，由mRNA产生的抗体意外地持久并且可以有效地实现全身性分布。mRNA的短暂性质还可以使通常与异源核酸相关联的安全问题降至最低。因此，本发明提供一种用于治疗用途的更安全、更便宜且更有效的抗体递送方法。

在一个方面，本发明提供一种通过向有此需要的受试者施用一种或多种编码抗体的重链和轻链的mRNA进行体内递送抗体的方法，并且其中该抗体在该受试者中进行全身性表达。在一些实施方案中，一种或多种mRNA包括编码重链的第一MRNA和编码抗体的轻链的第二mRNA。在一些实施方案中，一种或多种mRNA包括编码抗体的重链和轻链的单mRNA。

在一些实施方案中，编码重链和轻链的mRNA包括编码信号肽的序列。在一些实施方案中，编码重链和轻链的mRNA包括编码人生长激素(hGH)信号肽的序列(例如，SEQIDNO:9或SEQIDNO:10)。在一些实施方案中，编码信号肽序列的序列(例如SEQIDNO:9或SEQIDNO:10)与编码重链或轻链的mRNA序列在N-末端直接或间接地相连。

在一些实施方案中，编码重链的第一mRNA和编码轻链的第二mRNA以范围介于大约10:1至1:10(例如，介于约9:1至1:9、8:1至1:8、7:1至1:7、6:1至1:6、5:1至1:5、4:1至1:4、3:1至1:3或者2:1至1:2)之间的比例存在。在一些实施方案中，编码重链的第一mRNA和编码轻链的第二mRNA以范围介于大约4:1至1:4之间的比例存在。在一些实施方案中，编码重链的第一mRNA和编码轻链的第二mRNA以大约10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1或1:1的比例存在。在一些实施方案中，编码重链的第一mRNA和编码轻链的第二mRNA以大约4:1的比例存在。在一些实施方案中，编码重链的第一mRNA和编码轻链的第二mRNA以大约1:1的比例存在。在一些实施方案中，编码重链的第一mRNA和编码轻链的第二mRNA以大于1(例如，范围介于大约10:1至1:1、9:1至1:1、8:1至1:1、7:1至1:1、6:1至1:1、5:1至1:1、4:1至1:1、3:1至1:1或者2:1至1:1)的比例存在。