[发明专利]作为1型糖尿病的早期诊断指标的GAD抗体的高灵敏度测定方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及，用于确切评价－诊断作为1型糖尿病的初期症状的评价指标的GAD抗体的高灵敏度测定方法。

【背景技术】

糖尿病被定义为“是由胰岛素作用的不足的慢性高血糖作为主征，伴随各种的特征性的代谢异常的疾病群。其发症与遗传因子和环境因子均相关。于是，代谢异常的经长期间的持续容易导致特有的并发症，也促进动脉硬化症。另外，随代谢异常的程度，显示从无症状至酮酸中毒或昏睡的宽范围的病态。”(非专利文献1)。在日本，强烈疑似糖尿病的人及无法否定其可能性的状态的人(罹患危险者)被确定合计约2,210万人，今后也预计进一步增加(非专利文献2)。糖尿病，根据成因被分类为1型糖尿病、2型糖尿病、由特定的原因的其他糖尿病及妊娠糖尿病的4类，在其中也是1型糖尿病患者占5～10％、2型糖尿病患者占90～95％，几乎全部糖尿病是2型糖尿病患者。糖尿病的发症原因随各分类而不同，1型糖尿病被认为是，通过分泌胰岛素的胰腺的β细胞被破坏，至胰岛素的绝对的缺乏而发症。对此胰腺β细胞破坏的机制尚未被明确地解明，但被认为与自身免疫反应相关，作为其抗原，在胰腺β细胞特异性地表达的胰岛素被视为重要。

1型糖尿病被认为是自身免疫疾病之一，从1型糖尿病患者检测出数种的胰岛关联自身抗体(胰岛素自身抗体、GAD(谷氨酸脱羧酶)抗体、IA(胰岛素瘤相关抗原)-2抗体等)。特别是，在这些之中，最近受关注的是GAD抗体。GAD抗体是针对谷氨酸脱羧酶(谷氨酸脱羧酶：GAD)的自身抗体。由Baekkeskov等报告，在1型糖尿病患者血清中存在与胰岛的64kDa的蛋白质反应的抗体，得知此64kDa的蛋白质是GAD(非专利文献3)。在GAD中存在65kDa的GAD65和67kDa的GAD67的2种同种型，1型糖尿病患者的GAD抗体是针对GAD65的自身抗体(非专利文献4)。作为GAD抗体的阳性率，早期发症时显示高达70～80％的阳性率。但是，在发症5年往后，阳性率成50％以下，10年后降低至20％(非专利文献5)。另外，GAD抗体与胰岛素自身抗体、IA-2抗体相比，在发症时期不足9岁时阳性率低达70％，但在10岁以上时，阳性率变高至90％，即使是成人，阳性率也高达85％(非专利文献6)。

当从糖尿病患者检测到胰岛关联自身抗体时，诊断为1型糖尿病。但是，在瘦形的2型糖尿病患者之中见到，在发症时检测不到胰岛关联自身抗体，显示可由就餐或经口血糖降低药治疗的状态，但缓慢地胰岛素分泌能力降低，平均3年转到胰岛素依赖性糖尿病(1型糖尿病)的例。在此时间点的患者血清中胰岛关联自身抗体单独或重复示阳性，小林等将这样的亚型的1型糖尿病命名为缓缓慢进行1型糖尿病(Slowly progressive IDDM；SPIDDM)(非专利文献7)。

作为SPIDDM的诊断基准，虽尚未确立，可为在糖尿病发症后6～12个月之间可用就餐疗法或经口血糖降低剂治疗，及GAD抗体是阳性(非专利文献8)或GAD抗体、IA-2抗体、胰岛素自身抗体之中只要1个是阳性(非专利文献9)。SPIDDM的胰岛关联自身抗体阳性被报告率是GAD抗体69％、IA-2抗体39％、胰岛素自身抗体29％，GAD抗体被报告与IA-2抗体、胰岛素自身抗体比显著地更高(非专利文献9)。

如上所述，对GAD抗体而言，在SPIDDM中阳性率最高，被视为在诊断1型糖尿病上非常重要的诊断指标。但是，由以往的酶联免疫测定法(ELISA法)检测灵敏度低，所以难以早期的发现或检测低浓度的自身抗体。

因此，期待关于GAD抗体的，新的高灵敏度酶联免疫测定法的开发，期望早期的SPIDDM的发现和由胰岛素疗法的早期治疗。

【现有技术文献】

【非专利文献】

非专利文献1：清野裕、南條輝志男、田嶼尚子等：糖尿病の分類と診断基準に関する委員会報告、糖尿病53卷6号：450-467、2010

非专利文献2：厚生労働省健康局総務課生活習慣病対策室、2007年国民健康·栄養調査結果の概要、2008

非专利文献3：Baekkeskov S,Aanstoot HJ，Christgau S et al：Identification of the 64K autoantigen in insulin-dependent diabetes as the GABA-synthesizing enzyme glutamic acid decarboxylase.Nature347(6289)：151-156,1990