[发明专利]评估流式细胞仪中样品行为的方法和系统

说明书

相关申请的引用

本申请要求2013年2月1日提交的题为“评估流式细胞术中样品行为的方法和系统”的美国临时申请第61/759,878号的优先权，在此通过引用的方式将其内容整体并入本文。

背景

技术领域

本内容涉及通常涉及流式细胞术领域，更具体涉及样品分析方法。

背景

颗粒分析仪，例如流式细胞仪和扫描细胞仪，是能够基于光学参数(例如光散射以及荧光)分析颗粒特性的分析工具。例如，在流式细胞仪中，在流体悬浮的颗粒(例如分子、分析物结合珠或者单个细胞)通过检测区域时被暴露于通常来自一种或者多种激光器的激发光，并且测量颗粒的光散射以及荧光特性。通常用荧光染料标记颗粒或其组分以帮助检测。通过使用不同光谱的荧光染料标记不同的颗粒或者组分，可以同时检测多种不同的颗粒或者组分。在一些实施中，分析器包括多种光电探测器，每种用于每一待测量的散射参数，每种用于每一待检测的不同染料。获得的数据包括每一光散射参数以及荧光发射的测量信号。

细胞仪可以还包括记录测量数据以及分析数据的手段。例如可以通过与检测用电子产品相连的计算机实施数据的存储以及分析。例如，数据可以以表格的形式存储，每行对应于一个颗粒的数据，列对应于每项测量参数。使用标准文件格式，例如“FCS”文件格式，存储来自流式细胞仪的数据促进了使用单独的程序和/或机器分析数据。使用现有分析方法，通常将数据以2维(2D)平面图的形式展示以方便显示，但是可以使用其它方法来显示多维数据。

使用流式细胞仪测量的参数通常包括颗粒沿主要为向前方向散射的激发光(被称为前向散射(FSC))，颗粒沿主要为侧向方向散射的激发光(被称为侧向散射(SSC))，以及由在光谱的一个或者多个通道(频率范围)中的荧光分子发出的光(被称为FL1、FL2等)，或者在该通道中初始检测到的荧光染料发出的光。可以通过染料标记抗体标记的不同细胞蛋白的散射参数以及荧光发射来鉴定不同的细胞类型。

流式细胞仪以及扫描细胞仪都是可市购的，例如，从BD Biosciences(San Jose,Calif.)。流式细胞仪描述于，例如，Landy et al.(eds.),Clinical Flow Cytometry,Annals of the New York Academy of Sciences Volume 677(1993)；Bauer et al.(eds.),Clinical Flow Cytometry:Principles and Applications,Williams&Wilkins(1993)；Ormerod(ed.),Flow Cytometry:A Practical Approach,Oxford Univ.Press(1997)；Jaroszeski et al.(eds.),Flow Cytometry Protocols,Methods in Molecular Biology No.91,Humana Press(1997)；以及Practical Shapiro,Flow Cytometry,4th ed.,Wiley-Liss(2003)；通过引用的方式全部并入本文。荧光成像显微镜描述于，例如，Pawley(ed.),Handbook of Biological Confocal Microscopy,2nd Edition,Plenum Press(1989)，通过引用的方式并入本文。

荧光激活的细胞分选或者颗粒分选是流式细胞仪的具体类型。它提供将异质性颗粒混合物分选进两个或者更多的容器的方法，所述方法基于每个细胞特殊的光散射以及荧光特性，一次一个细胞。它记录来自单个细胞的荧光信号，并且物理性地分离具体目标细胞。首字母缩略词FACS是商标，并且属于Becton Dickinson。

将颗粒悬液置于狭窄、快速流动的液体流的中心。安排流动以使一般而言(泊松分布)颗粒之间相对于它们的直径有大的间隔。振动机制引起颗粒流变为单个液滴。调节系统以使在液滴中有多于一个颗粒的可能性较低。在流变为液滴之前，流动流经一个或者更多激光交点，在这里测量每一颗粒的目标荧光特性。如果颗粒将要被收集，在一个或者多个液滴形成并从流中中断的时间阶段，使流动的细胞带电。这些带电的液滴然后经过静电偏转系统落下，基于液滴所带的电荷将其转移至目标容器。