[发明专利]鸡堆型艾美耳球虫基因重组疫苗及其引物和应用

权利要求书

1.一种鸡堆型艾美耳球虫基因重组疫苗(pVAX1-Hsp90)，其特征在于，序列如序列表Seq No.1所示。

2.一种用于构建鸡堆型艾美耳球虫基因重组疫苗(pVAX1-Hsp90)的引物对，其特征在于，上引物P1：如序列表Seq No.2所示，下引物P2：如序列表Seq No.3所示。

3.根据权利要求1所述的一种鸡堆型艾美耳球虫基因重组疫苗(pVAX1-Hsp90)在治疗和/或预防鸡球虫的药物中的应用。

4.一种鸡堆型艾美耳球虫基因重组疫苗(pVAX1-Hsp90)的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)根据现有质粒pMD18-T-Hsp90的核苷酸序列设计引物对，上引物，序列如序列表Seq No.2所示，下引物如序列表Seq No.3所示；

(2)进行常规链式聚合酶反应扩增Hsp90基因；

(3)构建重组质粒pVAX1-Hsp90。

5.根据权利要求4所述的一种鸡堆型艾美耳球虫基因重组疫苗(pVAX1-Hsp90)的构建方法，其特征在于，所述的步骤(2)采用常规链式聚合酶反应的具体步骤如下：将混合液在94℃预变性5min，然后进入下列循环：94℃、30s，59.2℃、30s，72℃、2min，共进行30个循环，最后72℃延伸10min，扩增完毕后置4℃终止反应；

所述混合液组成如下所示：

6.根据权利要求4所述的一种鸡堆型艾美耳球虫基因重组疫苗(pVAX1-Hsp90)的构建方法，其特征在于，所述的步骤(3)质粒pVAX1-Hsp90的重组构建方法具体步骤如下：用限制性内切酶BamH I和Pst I酶切消化PCR所得Hsp90基因产物和pVAX1载体，分别获得Hsp90基因片段和线性载体pVAX1，将所得片段胶回收后进行体外连接，构建重组质粒pVAX1-Hsp90，将疑似阳性的质粒送华大基因测序，将测序鉴定为阳性的重组质粒命名为pVAX1-Hsp90。