[发明专利]一种防己青风藤提取物指纹图谱的测定方法

说明书

技术领域

本发明属于中药指纹图谱领域，特别涉及一种防己青风藤提取物指纹图谱的测定方法。

背景技术

防己为防己科植物粉防己Stephania tetrandra S.Moore的干燥根。青风藤来源于防己科植物青藤Sinomenium acutum(Thunb.)Rehd.et Wils.及毛青藤S.acutum(Thunb.)Rehd.et Wils.var.cinereum Rehd.et Wils.的干燥根茎。防己和青风藤分别被收载于中国药典2010年版一部，是常用中药，在复方中药中如防己黄芪汤、芪麝丸等中有应用。

防己中含有多种生物碱成分如粉防己碱和防己诺林碱；青风藤中也主要含有生物碱类成分如青藤碱。由于防己和青风藤同属防己科植物，有一定的植物亲缘关系，因此在所含成分方面有一定的交叉性，如木兰花碱是两种植物共同含有的成分。所含有的多种成分决定了其在液相色谱分离与检测中会以多个特征与专属的色谱峰形式出现，这些特征峰的数量及面积的大小对于监控中间体的质量可发挥重要的作用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种防己青风藤提取物指纹图谱的测定方法，该方法可有效地监控防己青风藤药材的质量，保证其在临床或生产应用时的有效、安全和稳定。

本发明的一种防己青风藤提取物指纹图谱的测定方法，包括：

(1)取防己青风藤提取物，精密称定，加入甲醇，35KHz～60KHz、280W超声提取5min，放冷，补足减失的溶剂重量，滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液；

(2)取青藤碱对照品、木兰花碱对照品、防己诺林碱对照品、粉防己碱对照品，精密称定，分别加入甲醇制成对照品溶液；

(3)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，即得防己青风藤提取物指纹图谱；其中，色谱条件为：色谱柱：Waters XSelect CSH C18色谱柱；柱温：25℃～40℃；检测波长：205nm～280nm；进样体积：10μl；流速：1ml·min^-1；流动相：流动相A为0.1％甲酸水，流动相B为甲醇；梯度洗脱程序：0～10min：5％B，10～80min：5％B→27％B，80～90min：27％B→35％B。

所述步骤(1)中的防己青风藤提取物的获取方式为：防己、青风藤经过水提取后减压浓缩和干燥后制得；或者防己、青风藤经过70％的乙醇回流提取后，经回收乙醇减压浓缩和干燥后制得；防己、青风藤经过水提取后减压浓缩至相对密度达1.06～1.16(70℃)，加入乙醇使含醇量达70％静置过夜，回收乙醇，减压浓缩和干燥后制得。

所述步骤(1)中的防己青风藤提取物与甲醇的比例为50mg:20ml；防己青风藤提取物中防己和青风藤的质量比为1:1～5。

所述步骤(1)中的微孔滤膜的孔径为0.22μm。

所述步骤(1)和(2)中的甲醇的体积百分数为5％。

所述步骤(2)中的对照品溶液具体为：每1ml各含青藤碱、木兰花碱、粉防己碱、防己诺林碱20ng～80ng的混合溶液。

所述步骤(3)中的Waters XSelect CSH C18色谱柱规格为4.6mm×250mm，填料粒度大小为5μm。

所述步骤(3)中的防己青风藤提取物指纹图谱中11个色谱峰被确定为共有色谱峰，通过与对照品保留时间的比较，确定峰2为青藤碱；峰6为木兰花碱；峰10为防己诺林碱；峰11为粉防己碱。

有益效果

本发明特对药材指纹图谱进行了研究，建立了液相指纹图谱测定条件，并进行了方法学考察，根据多批大生产样品，制订了防己青风藤提取物液相指纹图谱标准，在生产过程中可有效的指导投料、规范生产操作，真正确保了临床用药的安全、有效、可靠，对所测得的指纹图谱的辨认，采用国家药典委员会提供的中药色谱指纹图谱相似度评价系统，操作方便、快捷，以其得出的相似度结果，对药材指纹图谱进行评价，结论较为客观、准确。

附图说明

图1为对照品指纹图谱；其中，1为青藤碱；2为木兰花碱；3为防己诺林碱；3为粉防己碱；

图2为10个批次防己青风藤提取物指纹图谱；

图3为防己青风藤提取物标准指纹图谱；其中，2为青藤碱；6为木兰花碱；10为防己诺林碱；11为粉防己碱。

具体实施方式