[发明专利]一种防己青风藤提取物指纹图谱的测定方法

权利要求书

1.一种防己青风藤提取物指纹图谱的测定方法，包括：

(1)取防己青风藤提取物，精密称定，加入甲醇，35KHz～60KHz超声提取5min，放冷，补足减失的溶剂重量，滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液；

(2)取青藤碱对照品、木兰花碱对照品、防己诺林碱对照品、粉防己碱对照品，精密称定，分别加入甲醇制成对照品溶液；

(3)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，即得防己青风藤提取物指纹图谱；其中，色谱条件为：色谱柱：Waters XSelect CSH C18色谱柱；柱温：25℃～40℃；检测波长：205nm～280nm；进样体积：10μl；流速：1ml·min^-1；流动相：流动相A为0.1％甲酸水，流动相B为甲醇；梯度洗脱程序：0～10min：5％B，10～80min：5％B→27％B，80～90min：27％B→35％B。

2.根据权利要求1所述的一种防己青风藤提取物指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述步骤(1)中的防己青风藤提取物的获取方式为：防己、青风藤经过水提取后减压浓缩和干燥后制得；或者防己、青风藤经过70％的乙醇回流提取后，经回收乙醇减压浓缩和干燥后制得；防己、青风藤经过水提取后减压浓缩至相对密度达1.06～1.16，加入乙醇使含醇量达70％静置过夜，回收乙醇，减压浓缩和干燥后制得。

3.根据权利要求1所述的一种防己青风藤提取物指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述步骤(1)中的防己青风藤提取物与甲醇的比例为50mg:20ml；防己青风藤提取物中防己和青风藤的质量比为1:1～5。

4.根据权利要求1所述的一种防己青风藤提取物指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述步骤(1)中的微孔滤膜的孔径为0.22μm。

5.根据权利要求1所述的一种防己青风藤提取物指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述步骤(1)和(2)中的甲醇的体积百分数为5％。

6.根据权利要求1所述的一种防己青风藤提取物指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述步骤(2)中的对照品溶液具体为：每1ml各含青藤碱、木兰花碱、粉防己碱、防己诺林碱20ng～80ng的混合溶液。

7.根据权利要求1所述的一种防己青风藤提取物指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述步骤(3)中的Waters XSelect CSH C18色谱柱规格为4.6mm×250mm，填料粒度大小为5μm。

8.根据权利要求1所述的一种防己青风藤提取物指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述步骤(3)中的防己青风藤提取物指纹图谱中11个色谱峰被确定为共有色谱峰，通过与对照品保留时间的比较，确定峰2为青藤碱；峰6为木兰花碱；峰10为防己诺林碱；峰11为粉防己碱。