[发明专利]一种从地龙中提取的CAT酶

权利要求书

1.一种从地龙中提取的CAT酶，其特征在于，所述CAT酶由包括以下步骤的方法制备而成：

1)将地龙浸泡于pH4.8～5.2的0.015～0.025mol/L柠檬酸缓冲液中，分散成匀浆液，离心后取上清，即得粗酶液；

2)将硫酸铵加入步骤1)所得粗酶液中，静置，离心后收集沉淀；

3)将步骤2)所得沉淀溶解于pH7.0～7.4的0.01～0.02mol/L磷酸盐缓冲液中，将所得溶液加入平衡好的葡聚糖凝胶柱Sephadex G-25顶端，用本步骤所述磷酸盐缓冲液进行洗脱，收集含有蛋白质且不含硫酸铵的洗脱液，浓缩，得浓缩液；

4)在步骤3)所得浓缩液中加入NaCl，得到NaCl浓度为0.4～0.6mol/L的溶液，将所得溶液加入平衡好的金属螯合亲和柱顶端，用pH 5.8～6.2的0.015～0.025mol/L磷酸盐缓冲液进行洗脱，收集含有蛋白质的洗脱液，浓缩，冷冻干燥，即得CAT酶。

2.根据权利要求1所述的从地龙中提取的CAT酶，其特征在于，所述步骤1)中：分散成匀浆液的设备为高速剪切机，操作条件为-5～20℃、300～12000rpm、0.5～20min。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤1)所述柠檬酸缓冲液的浓度为0.02mol/L，pH值为5.0。

4.根据权利要求1所述的从地龙中提取的CAT酶，其特征在于，所述步骤2)具体为：将硫酸铵以质量体积比0.3～0.5:1溶解于步骤1)所得粗酶液中，静置20～40min，在0～4℃、7500～8500rpm条件下离心10～20min，分离上清液，收集沉淀；将硫酸铵以质量体积比0.7～0.9:1加入所得上清液中，静置20～40min，在0～4℃、8500～9500rpm条件下离心25～35min，收集沉淀；将两次收集所得的沉淀合并。

5.根据权利要求1所述的从地龙中提取的CAT酶，其特征在于，步骤3)所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.015mol/L，pH值为7.2。

6.根据权利要求1所述的从地龙中提取的CAT酶，其特征在于，步骤4)所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.02mol/L，pH值为6.0。

7.根据权利要求1所述的从地龙中提取的CAT酶，其特征在于，所述CAT酶由包括以下步骤的方法制备而成：

1)将地龙以质量体积比为1：1～20浸泡于pH4.8～5.2的0.015～0.025mol/L柠檬酸缓冲液中，用高速剪切机将地龙分散成匀浆液，操作条件为-5～20℃、300～12000rpm、0.5～20min；在-5～20℃、300～12000rpm条件下离心0.5～20min，取上清，即得粗酶液；

2)将硫酸铵以质量体积比0.3～0.5:1溶解于步骤1)所得粗酶液中，静置20～40min，在0～4℃、7500～8500rpm条件下离心10～20min，分离上清液，收集沉淀；将硫酸铵以质量体积比0.7～0.9:1加入所得上清液中，静置20～40min，在0～4℃、8500～9500rpm条件下离心25～35min，收集沉淀；将两次收集所得的沉淀合并；

3)将步骤2)所得沉淀以质量体积比1:1～5溶解于pH7.0～7.4的0.01～0.02mol/L磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲液中，将所得溶液加入平衡好的葡聚糖凝胶柱Sephadex G-25顶端，用本步骤所述磷酸盐缓冲液进行洗脱，收集含有蛋白质且不含硫酸铵的洗脱液，用PEG4000浓缩，得浓缩液；

4)在步骤3)所得浓缩液中加入NaCl，得到NaCl浓度为0.4～0.6mol/L的溶液，将所得溶液加入平衡好的金属螯合亲和柱顶端，用pH 5.8～6.2的0.015～0.025mol/L磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲液进行洗脱，收集含有蛋白质的洗脱液，用PEG4000浓缩，冷冻干燥，即得CAT酶。