[发明专利]一种基因工程菌及其应用

权利要求书

1.一种基因工程菌，包括宿主细胞和转入宿主细胞的目的基因，其特征在于，所述目的基因为黄孢原毛平革菌溶解性多糖单加氧酶的编码基因。

2.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述宿主细胞为酿酒酵母、汉森酵母或毕赤酵母；优选为毕赤酵母；更优选的，所述宿主细胞为毕赤酵母GS115。

3.根据权利要求1或2所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌内含有重组载体pPIC9K/Pc10320的核苷酸片段，所述Pc10320为SEQ ID NO.2所示的序列。

4.权利要求1-3中所述的基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

重组载体构建：以黄孢原毛平革菌的基因组cDNA为模板，利用SEQ ID NO：3所示的序列为上游引物，SEQ ID NO：4所示的序列为下游引物通过PCR反应获得PCR产物，再用SnaB I和Avr II对PCR产物和pPIC9K载体进行双酶切后连接获得重组载体pPIC9K/Pc10320；

重组载体的转化：利用大肠杆菌感受态细胞扩增所述重组表达载体并收集扩增产物，将所述扩增产物用SacⅠ进行酶切后转化宿主细胞获得基因工程菌。

5.权利要求1-3中所述的基因工程菌或者根据权利要求4所述的构建方法构建获得的基因工程菌在纤维素类原料降解中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述应用包括微晶纤维素降解和农作物秸秆降解。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

将所述基因工程菌接种至培养基中培养至OD₆₀₀为2-6，加入诱导剂进行诱导表达，分离纯化获得溶解性多糖单加氧酶10320，与纤维素酶混合后降解微晶纤维素或农作物秸秆。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述培养基的组成成分为：酵母粉10g/L、蛋白胨20g/L、pH6.0的磷酸钾l00mM、YNB13.4g/L、生物素4×10⁶g/L、甘油l0g/L。

9.根据权利要求5-8中任意一项所述的应用，其特征在于，诱导表达的条件为：在25-28℃，150-180rpm下培养，向培养基中添加100％甲醇至终浓度为1.0％；继续培养，每24小时添加甲醇至终浓度为1.0％，诱导72h后获得发酵液上清。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，相对于100g的所述纤维素类原料，所述溶解性多糖单加氧酶10320的添加量为0.1-1g，纤维素酶的添加量为5-15g。