[发明专利]一种人树突状细胞肿瘤疫苗的制备方法

权利要求书

1.一种人树突状细胞肿瘤疫苗的制备方法，其特征在于：在所述树突状细胞DC从未成熟向成熟的转变过程中加入DC促成熟剂，所述DC促成熟剂包括TLR激动剂OK-432和人重组蛋白gp100的组合。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述DC促成熟剂中OK-432的浓度为0.01~0.5 KE/mL，gp100的浓度为1 ~50 μg/mL。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述DC促成熟剂还包括TNF-α、IL-6、IL-1β和PGE₂中至少两种。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述TNF-α的浓度为500~1500U/mL，所述IL-6的浓度为2~20 ng/mL，所述IL-1β的浓度为2~20ng/mL，所述PGE₂的浓度为0.2~2 μM，所述OK-432的浓度为0.01~0.5KE/mL，所述gp100的浓度为1~50 μg/mL。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述DC促成熟剂由1000 U/mL TNF-α、10 ng/mL IL-6、10 ng/mL IL-1β、1 μM PGE₂、0.1 KE/mL OK-432和10 μg/mL gp100组成。

6.根据权利要求1~5任意一项所述的制备方法，其特征在于：所述gp100为gp100_280-288。

7.根据权利要求1~5任意一项所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1： 从分离的外周血单核细胞中获取单核细胞；

步骤2：诱导单核细胞向DC 分化；

步骤3：诱导已分化为未成熟DC 的单核细胞成为成熟的DC ，并在此过程中，加入肿瘤抗原和所述的组合型的DC促成熟剂；

步骤4：继续培养1-2 天，得到人树突状细胞肿瘤疫苗。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述步骤1具有如下分步骤：

子步骤1：采用血细胞分离机获得外周血单个核细胞PBMC；

子步骤2：将子步骤1所得的核细胞PBMC重悬于细胞培养装置中，加入培养基，调整细胞密度为(5～10)×10⁶/ml，进行贴壁培养1-2h；

子步骤3：除去上清液；再次加入培养基，除去上清液，重复操作至少1次清洗得到贴壁细胞，即为单核细胞。

9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述步骤2具体为：将含有10~100 ng/mL的rhGM-CSF、5~50 ng/mL rhIL-4的培养基加入步骤1获得的单核细胞培养装置内，继续培养；24~96h后进行全量换液，吸弃原有的培养基，然后补加含有10~100 ng/mL rhGM-CSF、5~50 ng/mL rhIL-4以及1～20μg/mL肿瘤抗原的培养基，继续培养。

10.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于：所述培养基包含无血清培养基与自体血清；所述无血清培养基为RPMI 1640、AIM-V和X-VIVO-15中的一种；所述自体血清的体积为无血清培养基体积的1~10%。