[发明专利]一种预示和鉴定鸡腹部脂肪量的分子标记方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种预示和鉴定鸡腹部脂肪量的分子标记方法及应用，属于动物分子遗传学技术领域。

背景技术

家禽育种工作在过去的几十年中依赖于表型的选择已经取得了令人瞩目的成绩，肉鸡的生长速度和肉产量得以明显提高。肉鸡业在世界范围内，尤其在中国等发展中国家具有良好的发展前景。然而长期以来，肉鸡体脂(尤其是腹脂)蓄积过多一直是困扰着世界范围内肉鸡育种工作者的重大问题，肉仔鸡体内沉积过多的脂肪有诸多不利：(1)明显降低饲料转化效率，因为沉积单位重量的脂肪比沉积单位重量的瘦肉多消耗三倍的能量；(2)降低了胴体瘦肉对脂肪组织的比例，因而降低了分割肉产量；(3)加工者和消费者将肉仔鸡体内沉积的很大一部分脂肪(腹脂垫、肌胃周围脂肪、嗉囔脂肪及肠系膜脂肪等)丢弃，这不仅增加了加工者和消费者的负担，而且增加了废物及处理水中的脂肪含量，从而污染了环境。由此看来，肉仔鸡体内沉积过多的脂肪将会给生产者、加工者和消费者造成显而易见的经济损失。肉种鸡过肥会严重影响产蛋率、受精率和孵化率，并且会诱导脂肪肝综合症(FLHS)的发生，从而加大了产蛋期的死淘率。因此，控制脂肪在鸡体内的过多蓄积，进一步提高肉鸡的饲料转化效率和胴体质量是我国急需研究解决的重大问题。选育低脂节粮型肉鸡配套系是世界范围内肉鸡育种的重要奋斗目标之一。

鸡蛋白前体加工酶1基因(proprotein convertase 1，PC1，也称为PC3或PCSK1)基因是蛋白前体加工酶(proprotein convertase，PC)家族成员。蛋白前体加工酶是一类Ca2+依赖性的丝氨酸蛋白酶家族，其主要功能是剪切无生物活性的蛋白或肽链的前体，使之变成有活性的功能分子。哺乳动物中已经发现的PCs家族成员主要有九种：包括PC1,PC2,Furin,PC4,PC5,PACE4,PC7,SKI-1/S1P/PC8和PCSK9/NARC-1/PC9。许多重要的生物学事件如酶原激活、肽类激素合成、病毒蛋白加工和生长因子及受体成熟均须PCs的剪切处理，包括神经肽类物质、多肽类激素、生长因子及其受体和基质金属蛋白酶家族(MMPs)等蛋白水解酶类的活性都受PCs调控。

哺乳动物上的研究结果表明，PC1基因主要在神经以及内分泌组织中表达，并且对能量代谢有重要的调节作用，包括胰岛素前体、POMC前体以及胰高血糖素前体的代谢。在人上，PC1缺乏症是一种罕见的单基因肥胖病，患者患有儿童肥胖、小肠吸收功能障碍以及各种内分泌紊乱。对影响人类肥胖的QTL定位结果表明，影响人类肥胖的基因位于染色体5q上，该染色体区域包含PC1在内的多个基因，而PC1基因多态性分析结果表明，在该基因上的两个位点的多态性与肥胖显著相关。另外，也有研究发现PC1基因发生变异后，会增加肥胖风险，这是由于PC1所编码的蛋白可以激活人体内控制食欲的胰岛素、胰高血糖素以及令人产生饱胀感的阿黑皮素原等。此外，近年来，针对人类肥胖症开展了全基因组关联分析，发现了一些肥胖相关的风险位点，其中包括PC1基因。PC1基因的表达产物为蛋白前体加工酶，因此它对许多影响食物消化吸收的重要激素都有调控作用。在小鼠垂体瘤细胞系中的研究结果发现，在细胞内干扰PC1基因后，与食物消吸收相关的重要基因的表达也会随之发生改变，进而影响动物体的进食以及对食物的吸收。

鸡的PC1基因CDS区全长2246bp，与鸡的基因组比对结果显示该基因位于鸡的Z染色体上。目前为止，尚未发现有关于鸡PC1基因功能研究的相关报道，同时，也没有通过PC1基因分子标记对鸡腹部脂肪含量进行选择的方法。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种预示和鉴定鸡腹部脂肪量的分子标记方法，所采取的的技术方案如下：

本发明的目的在于提供一种预示和鉴定鸡腹部脂肪量的分子标记方法，其特征在于，根据鸡PC1基因SNP位点g.28897G>A和g.29161C>T上下游250bp序列设计引物，再根据所得引物进行鸡基因组DNA的PCR扩增，之后利用限制性内切酶对扩增产物进行酶切，再对酶切产物进行电泳分离，最后利用限制性片段长度多态性聚合酶链反应技术(PCR-RFLP)分析基因多态性，获得鸡腹脂标记基因型；

所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.4所示。

所述鸡腹部脂肪量，是指鸡的腹脂重和腹脂率。

所述方法的步骤如下：

1)根据鸡PC1基因SNP位点g.28897G>A和g.29161C>T上下游250bp序列设计引物，获得扩增引物；