[发明专利]一种抗前列腺癌血蚶蛋白多肽及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种抗前列腺癌血蚶蛋白多肽，其特征在于该抗前列腺癌血蚶蛋白多肽的氨基酸序列为Pro-Gln-Trp-Pro-Pro，ESI/MS检测分子量为624.65 Da。

2.一种权利要求1所述的一种抗前列腺癌血蚶蛋白多肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

离心干燥步骤：以血蚶作为原料，取蚶肉组织绞碎，按固液比1 g：3~5 mL加入异丙醇，于30~35 ℃脱脂处理36~54 h后，于6 000 r/min离心10~15 min，取沉淀，干燥，得脱脂蚶肉；

酶解步骤：将脱脂蚶肉按固液比1 g：15~25 mL加磷酸盐缓冲液，按照脱脂蚶肉质量的1.0~2.0%加入中性蛋白酶，于55~65℃温度下酶解5~8 h；

提纯步骤：将酶解液加热到90~95℃灭活10~15 min，以12 000 r/min离心10~15 min，去除沉淀；上清液依次经超滤和层析，得到抗前列腺癌多肽；

酶解步骤中，所述的中性蛋白酶的酶活力≥1.5 AU/g；

酶解步骤中，所述的磷酸盐缓冲液浓度为0.02 mol/L，pH 为7.0；。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述提纯步骤的超滤和层析的具体过程为：

超滤：将上清液用截留分子量1 kDa的超滤膜进行超滤处理，根据对人前列腺癌PC-3细胞的增殖抑制活性，收集分子量小于1 kDa部分，得超滤酶解物；

层析：将上述超滤酶解物用双蒸水配成35~45 mg/mL的溶液，经过阴离子交换树脂分离，用双蒸水、0.08~0.12 mol/L、0.45~0.55 mol/L和0.90~1.10 mol/L NaCl溶液进行洗脱，根据220 nm下的吸光度曲线收集洗脱组分，其中，对人前列腺癌PC-3细胞增殖抑制活性最高组分为离子交换层析酶解物；将上述离子交换层析酶解物用双蒸水配成20~30 mg/mL的溶液，经过凝胶柱层析分离，用双蒸水进行洗脱，根据220 nm下的吸光度曲线收集洗脱组分，其中，对人前列腺癌PC-3细胞增殖抑制活性最高组分为凝胶层析酶解物，将上述凝胶层析酶解物用双蒸水配成45~55 μg/mL的溶液，利用反相高效液相色谱进行纯化，根据对人前列腺癌PC-3细胞的增殖抑制活性得1个高活性多肽Pro-Gln-Trp-Pro-Pro。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于所述阴离子交换树脂为DEAE-52纤维素，所述凝胶为葡聚糖凝胶G-25；所述RP-HPLC条件为：进样量15~20 μL；色谱柱为Zorbax C18，规格为4.6 × 250 mm；流动相：0~5 min为水，5~30 min为乙腈， 30~40 min为100%乙腈；洗脱速度1.0 mL/min；紫外检测波长220 nm；所述的5~30 min所采用的乙腈浓度从0匀速升至40%。

5.根据权利要求2所述的一种抗前列腺癌血蚶蛋白多肽的制备方法，其特征在于所制备的抗肿瘤肽Pro-Gln-Trp-Pro-Pro对PC-3细胞的增殖的半数抑制浓度为1.99 mg/mL。

6.权利要求1所述的一种血蚶蛋白多肽用于制备抗前列腺癌药物或保健食品的用途。