[发明专利]一种免疫层析检测方法及试纸

权利要求书

1.一种免疫层析检测方法，用于实现对待检样本的定性、半定量或定量检测；其特征在于，采用如下步骤：

反应膜包被：根据待检样本中的待检目标物确定包被抗体或抗原的种类，设定检测块及质控块的浓度和数量；

根据待检样本中的待检目标物制备结合物释放垫；

制备样本垫；

组装单个免疫层析检测试纸条：试纸条由底板，及依次设置在底板上的样本垫、结合物释放垫、反应膜、吸收垫构成；

组装免疫层析检测试纸：试纸是由二条或多条单个免疫层析检测试纸条无间隔组合固定在一起，相当于将特异性抗体或抗原以二个或多个四边形状组合固定于反应膜上；

（6）对待检样本进行检测：在试纸样本垫中加入待检样本，通过肉眼观察多个检测块和质控块的显色情况对待检样本进行定性或者半定量检测，或采用具有信号检测功能的仪器采集试纸上检测块和质控块的特征信号进行定量检测。

2.或者首先根据多个检测块的显色情况确定待检样本中的待检目标物，再通过肉眼观察多个检测块和质控块的显色情况对待检样本中不同的待检目标物进行定性或者半定量检测，或采用具有信号检测功能的仪器采集试纸上检测块和质控块的特征信号进行定量检测；

根据权利要求1所述的免疫层析检测方法，其特征在于：试纸的反应膜分成两个区域，一个是与结合物释放垫相邻的检测区，一个是与吸收垫相邻的质控区；检测区设有2至15个四边形状检测块，检测块的设定可以是同浓度或者不同浓度的同一种抗体或抗原，也可以是同浓度或者不同浓度的多种抗体或抗原；

所述质控区设有1至15个四边形状质控块，质控块包被有可与结合物释放垫上标记物结合的抗体或抗原。

3.根据权利要求1所述的免疫层析检测方法，其特征在于：相邻的单个免疫层析检测试纸条的检测块不在反应膜的同一水平位置。

4.根据权利要求1所述的免疫层析检测方法，其特征在于：所述结合物释放垫上标记有单一待检目标物相关的特异性抗体或抗原，或标记有各待检目标物相关的多个特异性抗体或抗原。

5.根据权利要求1所述的免疫层析检测方法，其特征在于：所述标记方法包括量子点标记法、胶体金标记法、胶体硒标记法、有色或荧光乳胶标记法、磁性颗粒标记法。

6.根据权利要求1所述的免疫层析检测方法，其特征在于：所述方法包括双抗体夹心法、间接法、竞争抑制法。

7.根据权利要求1所述的免疫层析检测方法，其特征在于：所述待检样本是来自临床或非临床的血液、体液、尿液、唾液、生殖道分泌液或其他液态样品或粘稠状样品。

8.根据权利要求1所述的免疫层析检测试纸，其特征在于：所述底板材料是PVC( 聚氯乙烯)板，反应膜材料是硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜，吸收垫的材料是滤纸，样品垫材料为玻璃纤维和无纺布，结合物释放垫材料是玻璃纤维或无纺布。

9.根据权利要求1-8所述的免疫层析检测试纸，其特征在于：试纸还可装配在与试纸的尺寸、样本加入的方式和位置、抗体或抗原在反应膜上固化的位置相吻合的塑料卡内成为试纸盒。

10.一种免疫层析检测试纸制备方法，其特征在于：准备生物活性原料：α-HCG单克隆抗体、β-HCG单克隆抗体、IgG多克隆抗体均来自市场购买；试剂：牛血清白蛋白来自市场购买；硝酸纤维素膜来自市场购买；

试纸制备程序如下：

步骤1.反应膜2包被

根据待检样本中的待检目标物确定包被抗体种类：α-HCG单克隆抗体、IgG多克隆抗体；

根据待检样本中的待检目标物设定检测块10及质控块11的浓度和数量：检测块10设置6个，4个不同浓度；质控块11设置5个，1个浓度；

制备检测块10包被有不同浓度的单个免疫层析检测试纸条反应膜2：将15.42mg/ml的α-HCG单克隆抗体、8.02mg/ml的IgG多克隆抗体根据设置的浓度稀释后，按照附图3的位置分别包被于硝酸纤维素膜上，干燥24h，温度为37℃，湿度≦40%RH；

步骤2.结合物释放垫5制备

取40nm的胶体金溶液，按1.2%比例加入0.2M的K₂CO₃（碳酸钾）调节PH值，按15μg/ml比例加入β-HCG单克隆抗体，制成标记物，放置室温5min，按0.8%比例加入BSA（牛血清白蛋白）稳定剂；

4500r离心30min，取浓缩沉淀物；将上清液继续6500r离心45min，取浓缩沉淀物；将上清液继续9000r离心60min，取浓缩沉淀物；将三次离心浓缩沉淀物混合均匀；

将离心好的浓缩液稀释好，铺于90cm×30cm的无纺布上，加液量10-11ml/张，干燥24h，温度37℃，湿度≦40%RH；

步骤3.样本垫4的制备

将切割成83.5cm×30cm的玻璃纤维和无纺布用包含0.5%NaCl（氯化钾）、0.5% 蔗糖、0.1%BSA（牛血清白蛋白）和Tris-HCl缓冲液(三羟甲基氨基甲烷-盐酸)(pH7.4) 工作液浸泡；

在37℃将所述垫干燥24h，获得样本垫4；

步骤4.按以下步骤分别组装4个浓度检测块10的单个免疫层析检测试纸条

将底板1平放在操作台上，贴上双面胶；

将包被好的反应膜2贴在底板1上；

将吸收垫3压反应膜2的2mm贴上，另一端与底板1对齐；

将一层无纺布压反应膜2的2mm处贴上；

将结合物释放垫5齐压于无纺布上面；

将玻璃纤维压于结合物释放垫5一半位置，另一端与底板1对齐；

再将一层无纺布一端与结合物释放垫5上端对齐，另一端与底板1对齐；

步骤5.组装试纸：将5条检测块10包被有4个浓度的单个免疫层析检测试纸条按附图3无间隔组合固定成一个试纸；

步骤6.产品检测：取含有HCG的待检样本尿液滴加到试纸样本垫4上，5min时判读结果，T₁显色，其它T块无显色，表示待检样本尿液中含HCG浓度为25-125mIU/ml；T₁、T₂、T₃显色，其它T无显色，表示待检样本尿液中含HCG浓度为125-500mIU/ml；T₁、T₂、T₃、T₄、T₅显色，T₆无显色，表示待检样本尿液中含HCG浓度为500-2500mIU/ml；T全部显色，则表示待检样本尿液中含HCG浓度为高于2500mIU/ml。