[发明专利]一种小单孢菌发酵生产庆大霉素的培养基及培养方法

说明书

技术领域

本发明属于发酵技术领域，特别是涉及一种小单孢菌发酵生产庆大霉素的培养基及培养方法。

背景技术

庆大霉素是由放线菌属小单孢菌发酵产生的氨基糖苷类广谱抗生素，1963年被美国人Weinstein首次发现，1969年被用于临床，是各种革兰氏阴性菌感染的主要抗菌药物之一。目前，国内采用小单孢菌发酵生产庆大霉素，存在的主要问题是：

1发酵生产工艺变化不大，发酵单位维持在1500u/ml左右，导致发酵产量较低。

2发酵培养基含有的动物性氮源质量影响发酵液质量和发酵效果。目前，国内发酵生产庆大霉素的培养基中加入玉米蛋白粉或鱼粉或二者同时加入，导致发酵后期剩余蛋白质较多，发酵液粘度较高，降低了提取收率。

3庆大霉素的生产成本较高，其中氮源的成本占到发酵成本的30％左右。

发明内容

本发明目的就在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种有效提高发酵单位，同时最大限度的降低原辅料用量，降低生产成本，且原辅料来源不受环境影响，保证其供应充足，实现庆大霉素稳定、高效生产的小单孢菌发酵生产庆大霉素的培养基。

本发明的另一目的是提供利用上述培养基生产庆大霉素的培养方法。

为实现上述目的所采取的技术方案为：

一种小单孢菌发酵生产庆大霉素的培养基，包括一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基，其特征在于所述一级种子培养基的组成为：麦芽糖10～20ml/L、混合淀粉20～30g/L、豆油或玉米油1～5ml/L、低温压榨一次黄豆饼粉25～35g/L、大米酒糟15～20g/L、玉米蛋白粉5～10g/L、轻质碳酸钙2～4g/L、硫酸铵1～5g/L，麦芽糖酶0.01～0.03g/L；

所述二级种子培养基组成为：麦芽糖20～25ml/L、混合淀粉30～40g/L、豆油或玉米油1～5ml/L、低温压榨一次黄豆饼粉40～45g/L、大米酒糟25～30g/L、玉米蛋白粉10～15g/L、磷酸二氢钾0.5～0.8g/L、轻质碳酸钙3～5g/L、硫酸铵3～5g/L、麦芽糖酶0.03～0.05g/L；

所述发酵培养基的组成为：麦芽糖30～50ml/L、混合淀粉40～60g/L、豆油或玉米油1～5ml/L、低温压榨一次黄豆饼粉50～60g/L、大米酒糟30～40g/L、玉米蛋白粉20～30g/L、磷酸二氢钾0.8～1.2g/L、轻质碳酸钙6～8g/L、硫酸铵5～8g/L、氯化钠4～6g/L、硫酸镁4～6g/L、氯化钴0.003～0.007g/L、非离子表面活性剂0.01～0.05g/L，弱酸性阳离子交换树脂1～5g/L，麦芽糖酶0.04～0.07g/L。

所述大米酒糟的质量要求是：蛋白质含量在50％以上，水分含量控制在5％以内，80％的原料能够通过60目筛。

所述低温压榨一次黄豆饼粉质量要求是：黄豆饼粉在低于80℃的条件下压榨1次，要求其油含量控制在7～10％，蛋白质含量在45％以上，80％的原料能够通过80目筛。

所述混合淀粉是指淀粉中加入其重量的0.006％的泛酸和0.004％的硫辛酸。

所述非离子表面活性剂为脂肪酸甘油酯、脂肪酸山梨坦或聚山梨酯。

所述弱酸性阳离子交换树脂为大丙烯酸系阳离子交换树脂、苯丙烯阳离子交换树脂或酚醛阳离子交换树脂。

一种利用上述培养基生产庆大霉素的培养方法，其特征在于其工艺步骤包括：

1)一级种子培养：首先将一级种子培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好的小单孢菌母瓶发酵液接入一级种子罐进行培养，接种量控制在一级种子培养基体积的0.5～1％；

2)二级种子培养：先将二级种子培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后将已经培养好的菌体浓度15～25％、pH值7～8、无其它杂菌污染的一级种子培养液按照1:9～11(体积比)比例移入二级种子罐进行培养；

3)发酵培养：先将发酵培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后将已经培养好的菌体浓度30～40％、pH值7～8、无其它杂菌污染的二级种子液按照1:5～6(体积比)比例移入发酵罐进行培养，至a发酵效价每6～8h取样检测，前、后检测的发酵单位相差在100u/ml以内；b菌体浓度30～50％；c发酵单位在2200u/mL以上；d pH值6.5～8.5时停止发酵。