[发明专利]一种小单孢菌发酵生产庆大霉素的培养基及培养方法

权利要求书

1.一种小单孢菌发酵生产庆大霉素的培养基，包括一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基，其特征在于所述一级种子培养基的组成为：麦芽糖10～20ml/L、混合淀粉20～30g/L、豆油或玉米油1～5ml/L、低温压榨一次黄豆饼粉25～35g/L、大米酒糟15～20g/L、玉米蛋白粉5～10g/L、轻质碳酸钙2～4g/L、硫酸铵1～5g/L，麦芽糖酶0.01～0.03g/L；

所述二级种子培养基组成为：麦芽糖20～25ml/L、混合淀粉30～40g/L、豆油或玉米油1～5ml/L、低温压榨一次黄豆饼粉40～45g/L、大米酒糟25～30g/L、玉米蛋白粉10～15g/L、磷酸二氢钾0.5～0.8g/L、轻质碳酸钙3～5g/L、硫酸铵3～5g/L、麦芽糖酶0.03～0.05g/L；

所述发酵培养基的组成为：麦芽糖30～50ml/L、混合淀粉40～60g/L、豆油或玉米油1～5ml/L、低温压榨一次黄豆饼粉50～60g/L、大米酒糟30～40g/L、玉米蛋白粉20～30g/L、磷酸二氢钾0.8～1.2g/L、轻质碳酸钙6～8g/L、硫酸铵5～8g/L、氯化钠4～6g/L、硫酸镁4～6g/L、氯化钴0.003～0.007g/L、非离子表面活性剂0.01～0.05g/L，弱酸性阳离子交换树脂1～5g/L，麦芽糖酶0.04～0.07g/L；

所述混合淀粉是指淀粉中加入其重量的0.006%的泛酸和0.004%的硫辛酸；

所述非离子表面活性剂为脂肪酸甘油酯、脂肪酸山梨坦或聚山梨酯；

所述弱酸性阳离子交换树脂为大丙烯酸系阳离子交换树脂、苯丙烯阳离子交换树脂或酚醛阳离子交换树脂。

2.按照权利要求1所述的小单孢菌发酵生产庆大霉素的培养基，其特征在于所述大米酒糟的质量要求是：蛋白质含量在50%以上，水分含量控制在5%以内，80%的原料能够通过60目筛。

3.按照权利要求1所述的小单孢菌发酵生产庆大霉素的培养基，其特征在于所述低温压榨一次黄豆饼粉质量要求是：黄豆饼粉在低于80℃的条件下压榨1次，要求其油含量控制在7～10%，蛋白质含量在45%以上，80%的原料能够通过80目筛。

4.一种利用权利要求1-3任意一项所述培养基生产庆大霉素的培养方法，其特征在于其工艺步骤包括：

1）一级种子培养：首先将一级种子培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好的小单孢菌母瓶发酵液接入一级种子罐进行培养，接种量控制在一级种子培养基体积的0.5～1%；

2）二级种子培养：先将二级种子培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后将已经培养好的菌体浓度15～25%、pH值7～8、无其它杂菌污染的一级种子培养液按照1:9～11的体积比移入二级种子罐进行培养；

3）发酵培养：先将发酵培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，然后将已经培养好的菌体浓度30～40%、pH值7～8、无其它杂菌污染的二级种子液按照1:5～6的体积比移入发酵罐进行培养，至a 发酵效价每6～8h取样检测，前、后检测的发酵单位相差在100u/ml以内；b 菌体浓度30～50%；c 发酵单位在2200u/mL以上；d pH值6.5～8.5时停止发酵。

5.按照权利要求4所述的培养方法，其特征在于所述一级种子培养条件为：罐压0.04～0.08MPa；罐温34～37℃；空气流量：0～10h，50～60m³/h；6h～移种：80～100m³/h；搅拌转速60～100r/min；pH7～8；培养时间50～55h。

6.按照权利要求4所述的培养方法，其特征在于所述二级种子培养条件为：罐压0.04～0.08MPa；罐温33～35℃；空气流量100～300m³/h；搅拌转速100～120r/min；pH值7～8；培养时间：40～50h。

7.按照权利要求4所述的培养方法，其特征在于所述发酵培养条件为：

a 脂肪控制：发酵培养基灭菌后脂肪控制在4～6%；发酵前80h，脂肪含量控制在4.5%以上；发酵81～110h，脂肪含量控制在3.5～4.5%；111h至发酵结束，脂肪含量控制在1.5～2%；

b 发酵过程采用变温培养：

发酵前60h，培养温度控制在35～37℃，

发酵61h～发酵结束，培养温度控制在34～35℃；

c 搅拌转速：150～220r/min；

d 还原糖含量：发酵培养基灭菌后还原糖控制在6～8%；发酵前80h，还原糖含量控制在6%以上；发酵81～110h，还原糖含量控制在4～6%；发酵111h至发酵结束，还原糖含量控制在1～2%；

e 发酵周期：培养时间150～160h；

f 压力控制：发酵全程罐压控制在0.06～0.08MPa；

g pH控制：发酵过程中pH6.5～7.5；

h 无菌检查：发酵过程中进行菌检，要求无其它杂菌；

i 空气流量：发酵前80h：400～600m³/h；发酵81～110h，800～1000m³/h；发酵111h至发酵结束，300～500m³/h。