[发明专利]鉴别南方红豆杉幼苗的分子特异性标记引物及方法有效
| 申请号： | 201410808716.4 | 申请日： | 2014-12-22 |
| 公开（公告）号： | CN104480211A | 公开（公告）日： | 2015-04-01 |
| 发明（设计）人： | 沈晨佳;冯尚国;王慧中 | 申请（专利权）人： | 杭州师范大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 杜军 |
| 地址： | 311121 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 鉴别 南方 红豆杉 幼苗 分子 特异性 标记 引物 方法 | ||
1. 鉴别南方红豆杉幼苗的分子特异性标记引物，其特征在于该引物核苷酸序列如下：
上游引物NHSF：5’-CCCGAAGTGTCGCCGGGCAGCC-3’，如SEQ ID NO.1所示；
下游引物NHSR：5’-TCCGCACAAATCCGTGACCTCG-3’，如SEQ ID NO.2所示。
2.如权利要求1所述的分子特异性标记引物，其特征在于该分子特异性标记引物在鉴别南方红豆杉T. Chinensis、曼地亚红豆杉T. Madia、东北红豆杉T.cuspidata中的应用。
3.一种利用如权利要求1所述的分子特异性标记引物进行鉴别南方红豆杉T. chinensis及曼地亚红豆杉T. madia和东北红豆杉T.cuspidata的方法，其特征在于该方法是首先提取待测红豆杉幼苗样本基因组DNA作为模板，以分子特异性标记引物NHSF/NHSR作为扩增引物，进行PCR扩增，得到扩增产物；然后对扩增产物进行电泳检测：若电泳结果出现695 bp的DNA条带，则待测红豆杉样本为南方红豆杉T. chinensis；若电泳结果未出现695 bp的DNA条带，则待测红豆杉样本为曼地亚红豆杉T. madia或东北红豆杉T.cuspidata。
4.如权利要求3所述的利用如权利要求1所述分子特异性标记引物进行鉴别南方红豆杉T. chinensis及曼地亚红豆杉T. madia和东北红豆杉T.cuspidata的方法，其特征在于所述的分子特异性标记引物NHSF/NHSR，其核苷酸序列如下：
上游引物NHSF：5’-CCCGAAGTGTCGCCGGGCAGCC-3’，如SEQ ID NO.1所示；
下游引物NHSR：5’-TCCGCACAAATCCGTGACCTCG-3’，如SEQ ID NO.2所示。
5.如权利要求3所述的利用如权利要求1所述分子特异性标记引物进行鉴别南方红豆杉T. chinensis及曼地亚红豆杉T. madia和东北红豆杉T.cuspidata的方法，其特征在于该方法仅适用于待测样本为南方红豆杉T. chinensis样本、曼地亚红豆杉T. madia样本及东北红豆杉T.cuspidata样本。
6.如权利要求3所述的利用如权利要求1所述分子特异性标记引物进行鉴别南方红豆杉T. chinensis及曼地亚红豆杉T. madia和东北红豆杉T.cuspidata的方法，其特征在于PCR反应程序为：94℃预变性5 min；94℃变性45 s，64℃退火45 s，72℃延伸1.5 min，35个循环；最后于72℃下延伸10 min。
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