[发明专利]分离的编码ACD突变体的核酸及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及分离的编码ACD突变体的核酸及其应用，更具体地，涉及分离的编码ACD突变体的核酸、分离的多肽、筛选易患遗传性骨髓衰竭症的生物样品的系统、用于筛选易患遗传性骨髓衰竭症的生物样品的试剂盒、构建体、重组细胞以及构建药物筛选模型的方法。

背景技术

端粒是在线性染色体末端的重复DNA蛋白复合物，并随着体细胞分裂数的增加而缩短。端粒缩短到一定的程度会激活DNA损伤反应，进而引起细胞衰老和凋亡。生殖细胞，干细胞及胚胎发育中的细胞主要通过核糖核蛋白端粒酶的表达来克服端粒的缩短。端粒酶通过RNA(也称hTR)逆转录将端粒DNA重复序列加到染色体末端。人类端粒酶复合物的核心主要由hTR，逆转录酶蛋白(hTERT)和RNA结合蛋白角化不良蛋白(dyskerin)。端粒酶在其生成和运输到端粒的过程中需要和许多蛋白相互作用，如蛋白TCAB1(也称作WDR79和WRAP53)，主要负责将端粒酶运输到核卡哈尔小体，再从那运输到端粒。

端粒及其相关结合蛋白异常容易引起人的多种疾病。例如，继承短端粒的人容易患“短端粒综合征”，最先发现的这类疾病是先天性角化不良，表现为粘膜与皮肤交界处不正常的色素沉积，口腔白斑，指甲营养不良，并患有由造血祖细胞和干细胞功能缺失导致的渐进性骨髓衰竭。

由此，有待于对端粒及其相关蛋白基因突变引起的疾病进行进一步研究。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种有效筛选遗传性骨髓衰竭症的生物样品的方法。

需要说明的是，本发明是基于发明人的下列工作而完成的：

端粒结合蛋白TPP1(由ACD基因转录翻译而来，也被称为PTOP，PIP1，TINT2)对端粒的稳定性及长度调节特别重要。TPPA通过与TIN2的相互作用结合到端粒上，并导致单链DNA结合蛋白Pot1结合到端粒上。Pot1需要TPP1保护端粒不被错认为DNA有害物质，Pot1/TPP1异质二聚体同时也促进着端粒酶的不断合成。也就是它具有合成大片段的端粒DNA的能力。TPP1表面上的TELpatch介导它与端粒酶的相互作用，在促使端粒酶结合到端粒上发挥着重要的作用。

发明人利用特制的DNA序列探针将全基因组中的外显子区域捕获下来，然后针对每个外显子进行深度测序。并在目标区域测序找到了ACD基因的第16号染色体3个碱基CTT的缺失，该缺失导致TPP1的TELpatch上一个氨基酸的丢失进而导致了该病。相比于传统的连锁分析、候选基因关联分析技术，本发明采用的外显子组测序技术针对基因组内编码蛋白质的外显子区域，目标集中，测序深度和精度更高。

因而，根据本发明的第一方面，本发明提供了一种分离的编码ACD突变体的核酸。根据本发明的实施例，所述核酸与SEQIDNO：1相比，具有c.499_501del突变。发明人惊奇的发现，该突变体与遗传性骨髓衰竭症的发病密切相关，从而通过检测该突变体在生物样品中是否存在，可以有效地检测生物样品是否易患遗传性骨髓衰竭症，根据本发明的实施例，该突变体的核酸进一步丰富了ACD基因的致病突变图谱，更深入阐明了遗传性骨髓衰竭症的分子发病机制，为遗传性骨髓衰竭症的早期致病基因筛查和干预治疗提供科学依据。

根据本发明的第二方面，本发明还提供了一种分离的多肽。根据本发明的实施例，与SEQIDNO：3相比，所述分离的多肽具有p.Lys167del突变。具体地，致病基因ACD/TPP1上三碱基缺失chr16:67,693,688CCTT>C；c.499_501del，导致p.Lys167del突变，且患者的该致病基因为杂合体。通过检测生物样品中是否表达该多肽，可以有效地检测生物样品是否易患遗传性骨髓衰竭症。

根据本发明的第三方面，本发明还提供了一种筛选易患遗传性骨髓衰竭症的生物样品的系统。该系统包括：核酸提取装置，所述核酸提取装置用于提取所述生物样品中的核酸样本；核酸序列确定装置，所述核酸序列确定装置与所述核酸提取装置相连，用于对所述核酸样本进行分析，以便确定所述核酸样本的核酸序列；以及判断装置，所述判断装置与所述核酸序列确定装置相连，以便基于将所述核酸的序列与SEQIDNO：1相比，是否具有c.499_501del突变，判断所述生物样品是否易患遗传性骨髓衰竭症。发明人惊奇地发现，利用该系统可以对遗传性骨髓衰竭症进行基因层面的检测，有助于更准确的筛选易患遗传性骨髓衰竭症的生物样品。