[发明专利]一种植物组成型过量表达载体、分枝且高产油菜的制备方法

权利要求书

1.一种植物组成型过量表达载体，其特征在于，该表达载体由35S启动子驱动OsDHHC1基因和GUS基因形成的融合基因，即35S：：OsDHHC1-GUS；其中，所述OsDHHC1基因是水稻中编码DHHC型锌指蛋白的Os02g0819100基因的另外一种剪接方式，其碱基序列如SEQ ID NO：1所示。

2.权利要求1所述的植物组成型过量表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)以水稻cDNA为模板，通过引物进行PCR扩增；其中，所述引物为：

OsDHHC1基因引物-F：

5’-CATGCATGCCATGGTGCTGGCACATATATCTCTTATGTC-3’，

OsDHHC1基因引物-R：

5’-GGAAGATCTGGAAGATCTGTTGTTTGTGATCTGGAACTCAGTG-3’；

(2)将步骤(1)中的PCR扩增产物克隆到pUCm-T载体中，经测序鉴定后，用NcoI和BglII双酶切pUCm-T载体和pCAMBIA1301载体，分别回收小片段和大片段，然后进行连接；

(3)将步骤(2)得到的连接产物转化大肠杆菌DH5α，经抗生素筛选获得阳性克隆；提取阳性克隆的质粒，得到植物组成型过量表达载体。

3.如权利要求2所述的植物组成型过量表达载体的构建方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述转化的方法是农杆菌介导的遗传转化方法。

4.如权利要求3所述的植物组成型过量表达载体的构建方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述转化的方法为将所述植物组成型过量表达载体电击转化农杆菌GV3101，经100μg/ml利福平和50μg/ml卡那霉素筛选获得阳性克隆，再进行农杆菌介导的遗传转化。

5.一种分枝且高产油菜的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)通过权利要求1所述植物组成型过量表达载体转化甘蓝型油菜植株；

(2)通过抗性筛选和RT-PCR鉴定得到获得分枝且高产油菜。

6.如权利要求5所述的分枝且高产油菜的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述转化采用农杆菌介导的转基因方法。

7.如权利要求6所述的分枝且高产油菜的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)具体包括：

对T1代幼苗进行潮霉素抗性筛选，获得的抗性幼苗实行单株收种；

对T2代幼苗继续进行潮霉素抗性筛选，获得纯合子转基因株系；

采用RT-PCR方法对获得的纯合子转基因株系进行鉴定，获得目的基因OsDHHC1表达量明显增加的转基因纯合子株系。