[发明专利]一种银耳胞内多糖分离、纯化的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种银耳胞内多糖分离、纯化的方法，属于生化工程技术领域。

背景技术

银耳（Tremella）, 生于温带和亚热带地区, 是有隔担子菌亚纲银耳科银耳的子实体, 又称白木耳。作为一种珍贵的食用菌和重要药材, 银耳平甘无毒, 滋阴、润肺、养胃、生津,治疗肺热咳嗽、胃炎、大便下血、痢疾、面部面斑、癌症肿瘤等病症。

银耳多糖具有广泛的药理学作用。调节机体免疫功能是许多多糖的主要药理学作用之一, 是多糖的共性。

    人体肠胃道非免疫系统主要为内源微生物群。这些正常微生物是人体胃肠道中不可缺少的组成部分, 通常又分为有益微生物(如双歧杆菌属、乳酸杆菌属)和有害微生物群(如产气荚膜梭菌属、葡萄球菌属)。有益微生物菌群通常覆盖在胃肠道黏膜上皮表面, 阻止病原微生物在肠道黏膜组织上的定植。据目前的研究结果来看银耳多糖可能具有果寡糖、甘露寡糖、木糖的类似作用, 能直接到达后肠作为双歧杆菌和乳酸杆菌特异性的营养物质, 促进肠道理想微生物菌群的形成, 增强人体对外源性病原菌的抵抗能力, 改善肠道的健康状况, 起到提高人体非免疫防御系统的作用。研究表明, 银耳多糖能增强小鼠机体体液免疫。银耳多糖可增强正常小鼠及改善免疫功能低下小鼠的体液免疫功能。银耳多糖-Fe (Ⅲ)配合物能减缓膜的脂质过氧化反应和抑制邻苯三酚自氧化产生的氧自由基对红细胞膜的损伤, 起到对细胞膜的保护作用。银耳多糖可明显促进正常小鼠和部分肝切除小鼠的肝脏蛋白质及核酸合成, 且银耳多糖可优先促进损伤肝脏的修复。银耳多糖亦可通过促进核酸及蛋白质的合成、增加肝微粒体细胞色素P-450 含量、增强机体免疫功能而发挥抗衰老作用。银耳多糖可明显降低高脂血症大鼠血清游离胆固醇、胆固醇脂、甘油三酯、β-脂蛋白含量, 降低高胆固醇血症小鼠总胆固醇含量, 并可预防小鼠高胆固醇血症的形成。银耳多糖具有明显的抗血栓形成作用。银耳多糖可对抗环磷酰胺引起的小鼠骨髓微核率增加, 同时还可防止受照射动物的淋巴细胞染色体发生畸变。银耳多糖对中枢神经系统、呼吸系统、血液系统及心、肝、肾等均无毒性作用, 不影响小鼠的生殖能力和幼仔的成活率。银耳多糖亦不会引起急、慢性中毒, 无三致作用, 属无毒性物质。

目前银耳多糖的提取方法常用的有热水浸提法、酸提取法、碱浸提法等。酸、碱的添加对提取过程中已溶银耳多糖的结构有一定的破坏。银耳多糖提取液黏度的大小与其浓度的大小成正比, 即提取液的浓度越大, 其黏度也越大;热力对银耳多糖的结构有一定的破坏作用, 提取液的温度越高, 其黏度越小;酸碱性的改变会导致提取液中银耳多糖的分解, 使其提取液的黏度下降。

银耳多糖无甜味, 易溶于热水。银耳多糖的种类较多, 其中大多数是以α-(1 , 3)连接的甘露糖为主链, 目前分为五大类, 分别为酸性杂多糖、中性杂多糖、胞壁多糖、胞外多糖及酸性低聚糖五类。最具代表性的是银耳酸性杂多糖，其结构是以α-甘露聚糖为主链, 以β-(1 , 2)L-木糖、β-(1 , 2)葡萄糖醛酸和少量的岩藻为侧链, 其分子中有典型的乙酰基结构。

     银耳多糖属于大分子物质，其分子量较大，而且它的理化性质及生物活性较为复杂。目前对于银耳多糖的研究的一个非常重要的方面就是银耳多糖的分子量及其分布，而银耳多糖的分子量又与其理化性质及活性存在着一定的关系，且它也是多糖类药物的一个重要参数。由于分子量较大的多糖活性、结构较为复杂，所以银耳多糖的提取及纯化至关重要，提取不当或纯化不当，银耳多糖很容易失去活性。

发明目的

    本发明提供一种高效提取分离银耳多糖的方法，既提高银耳多糖的得率同时保持多糖的生物活性。

发明内容

一种银耳胞内多糖分离、纯化的方法，包括以下步骤：

（1）将银耳粉碎至40～60目，加20～40倍水浸泡1～2h，打浆；向打浆液中加入混合酶，30～40℃条件下搅拌酶解1.5～2.5 h，酶解结束后，将混合渣液置于循环超声提取机中进行提取；

（2）循环超声提取结束后，固液分离，上清液进行浓缩；浓缩倍数为提取液体积的1/6～1/8，优选1/7；提取液浓缩后加85%乙醇进行静置沉淀，得银耳胞内多糖沉淀物；

（3）银耳胞内多糖沉淀物加10～15倍去离子水,采用超声波辅助溶解，超声波功率为100W,超声时间为20～30min，溶解液上D101树脂，采用去离子水进行层析；

（4）将层析液过DEAE纤维素树脂进行分离，洗脱至流出液检测不到多糖停止洗脱，合并洗脱液。