[发明专利]一种银耳胞内多糖分离、纯化的方法

权利要求书

1.一种银耳胞内多糖分离、纯化的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将银耳粉碎至40～60目，加20～40倍水浸泡1～2h，打浆；向打浆液中加入混合酶，30～40℃条件下搅拌酶解1.5～2.5 h，酶解结束后，将混合渣液置于循环超声提取机中进行提取；

（2）循环超声提取结束后，固液分离，上清液进行浓缩；浓缩倍数为提取液体积的1/6～1/8，优选1/7；提取液浓缩后加85%乙醇进行静置沉淀，得银耳胞内多糖沉淀物；

（3）银耳胞内多糖沉淀物加10～15倍去离子水,采用超声波辅助溶解，超声波功率为100W,超声时间为20～30min，溶解液上D101树脂，采用去离子水进行层析；

（4）将层析液过DEAE纤维素树脂进行分离，洗脱至流出液检测不到多糖停止洗脱，合并洗脱液；

（5）将洗脱液进行浓缩干燥，得纯化后的银耳多糖，

步骤(1)中所述的混合酶为纤维素酶与蛋白酶的混合物,二者比例为纤维素酶:蛋白酶=2:1, 纤维素酶的酶活为200-500u/ml, 蛋白酶的酶活为5-10 万u/g。

2.  如权利要求1所述的一种银耳胞内多糖分离、纯化的方法，其特征在于：步骤（1）中所述的银耳与水的比例为1:30~1:35，优选1:32。

3. 如权利要求1所述的一种银耳胞内多糖分离、纯化的方法，其特征在于：步骤（1）中所述的循环超声提取条件为：温度30~35℃，优选35℃；超声功率为500~1000W，优选900W；循环搅拌转速500~1000 rpm，优选800rpm；占空比1:2; 超声提取时间2.5~3.5h，优选3h。

4. 如权利要求1所述的一种银耳胞内多糖分离、纯化的方法，其特征在于：步骤（2）中浓缩方式可采用真空减压浓缩或膜浓缩。

5. 如权利要求1所述的一种银耳胞内多糖分离、纯化的方法，其特征在于：步骤（4）中所述的DEAE纤维素树脂为DE52或DE32中的一种，优选DE52。

6. 如权利要求1所述的一种银耳胞内多糖分离、纯化的方法，其特征在于：步骤（5）中所述的洗脱液的干燥方式为冷冻干燥或喷雾干燥。

7. 如权利要求6所述的一种银耳胞内多糖分离、纯化的方法，其特征在于：银耳多糖的干燥方式为喷雾干燥的最优条件为：进风温度160~200℃，优选180℃；出风温度为70~100℃，优选90℃；进料固形物含量为50~80%，优选60%。

8. 如权利要求6所述的一种银耳胞内多糖分离、纯化的方法，其特征在于：银耳多糖的干燥方式为冷冻干燥的最优条件为：冷冻温度-20 ~ -80℃, 优选 -40℃； 固形物含量为70~90%，优选80%。