[发明专利]一种多肽菌素、其制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种多肽菌素、其制备方法及其应用。具体而言，本发明提供具有免疫提高促进、细胞组织修复和/或抗菌促生长的作用的多肽菌素、其制备方法及其在制备抗生素替代品或畜禽业的应用。

背景技术

自Moore等(1946)首次报道，在饲料中添加抗生素能明显提高肉鸡的日增重以来，人们对抗生素的研究和应用越来越广泛，先后有60余种抗生素应用于畜牧业，在动物疾病防治、提高饲料利用率、促进畜禽生长等方面发挥了重要作用。但随着抗生素的大量使用，特别是不科学地滥用，细菌耐药性和药物残留等问题日益突出，引起世界各国政府及业内人士的高度重视。2006年，欧盟全面禁止了抗生素饲料添加剂的应用。我国是畜禽生产大国，由于抗生素在我国养禽业的大量使用，特别是不科学地滥用，导致药物残留超标等问题，出口量仅占生产量的0.9％～1.2％。

养殖业中抗生素滥用的危害主要包括：

1.导致细菌产生抗药性

虽然耐药性因子的传递频率只有10-6，但由于细菌数量大、繁殖快，在这一频率下，仍造成抗药菌株的扩散、蔓延，而且可以使一种细胞产生多种耐药性。抗生素滥用导致耐药菌株增加，而抗生素饲料添加剂长期、大量不合理使用是其中一条主要原因。畜牧业中，大肠杆菌、葡萄球菌、沙门氏菌等过去并不严重或较少发生的细菌病，现已上升为家禽的主要传染病，这与长期滥用抗生素有直接关系。

2.造成畜禽机体免疫力下降

大量抗生素在其被摄入机体后，会随血液循环分布到淋巴结、肾、肝、脾、胸腺、肺和骨骼等各组织器官，动物机体的免疫能力就被逐渐削弱，人和动物慢性病例增多，一些可以形成终生坚强免疫的疾病频频复发。抗生素还会导致抗原质量降低，直接影响免疫过程，从而对疫苗的接种产生不良影响。

3.引起畜禽内源性感染和二重感染

抗生素虽都有自己的抗菌谱，但基本都难以避免在作用于病原菌同时会影响机体内有益菌群生长，尤其是长期、大量使用，会造成机体内菌群失调，微生态平衡破坏。潜伏在体内的有害菌趁机大量繁殖，而引起内源感染。另外一种情况，抗生素会消灭体内敏感菌，在体内一些微生物附着点上造成大量空位，为外界耐药病菌乘虚而入提供机会，从而造成外源感染。二重感染也是由于施用大量抗生素杀灭某种细菌时，破坏微生态平衡，另外一种或多种内源或外源病菌随即再次感染机体造成的。

4.在畜产品和环境中造成残留

抗生素被吸收到体内后，分布到几乎全身各器官，但大多数抗生素都难以透过机体的几个“天然屏障”，如血脑屏障、血睾屏障等。抗生素在内脏器官尤其是肝脏内分布较多，而在肌肉和脂肪中分布较少。抗生素的代谢途径多种多样，但大多数以肝脏代谢为主，经胆汁、由粪便排出体外；也会通过泌乳和产蛋过程残留在乳和蛋中。一些性质稳定的抗生素被排泄到环境中后仍能稳定存在很长一段时间，从而造成环境中的药物残留。这些残存的药物，通过畜产品和环境慢慢蓄积于人体和其它植物体中，最终以各种途径汇集于人体，导致人体产生大量耐药菌株，失去对某些疾病的抵抗力，或因大量蓄积而对机体产生毒害作用。

因此，在全球经济一体化的时代，要提高我国畜禽产品的国际竞争力，抗生素安全问题及对策研究已成为畜牧工作者的研究方向，寻找无公害的抗生素替代品已成为畜牧工作者迫在眉睫的课题。

发明内容

本发明提供了一种可作为抗生素替代品的多肽(以下称为多肽菌素)，其具有免疫提高促进、细胞组织修复和/或抗菌促生长的作用。

本发明提供的多肽菌素的氨基酸序列为：Gly-Lys-Ser-Gln-Glu-Tyr-Leu-Gly。

此外，本发明还提供了上述多肽的制备方法，其包括根据Fmoc-固相多肽合成法合成粗品多肽，优选的是，所述方法还包括使用反相高效液相色谱对所述粗品多肽进行纯化。

具体而言，所述Fmoc-固相多肽合成法中，以二氯树脂(2-Chlorotrityl Chloride)为固相载体，HOBt(1-羟基-苯并-三氮唑)/TBTU(苯并三唑四甲基四氟硼酸)/DIEA (N,N'-二异丙基乙胺))为催化剂，二甲基甲酰胺DMF为溶剂和清洗剂，三氟乙酸(TFA)/1,2-乙二硫醇(EDT)/H₂O为切割剂，进行所述粗品多肽的合成。

其中在合成时，所述方法使用分别使用下述氨基酸进行合成：

Gly:Fmoc-Gly-OH；

Lys:Fmoc-Lys(Boc)-OH

Ser:Fmoc-Ser(tBu)-OH

Gln:Fmoc-Gln(Trt)-OH