[发明专利]甜茶素的质量控制方法

权利要求书

1.一种甜茶素的质量控制方法，其特征在于甜茶素样品采用高效液相色谱法测定，其色谱条件为：

色谱柱为十八烷基键合硅胶填充剂；

分别以乙腈-水体积比为10-90:90-10、甲醇-水体积比为20-80:90-10为流动相；

检测波长205-215nm；

流速为0.5～5毫升/分钟。

2.如权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于：

分别以乙腈-水体积比为50:50、甲醇-水体积比为40:60为流动相；

检测波长205、210nm；

流速为0.8～1.2毫升/分钟；

含量与纯度测定：分别用2个流动相溶剂系统和2个检测波长，记录色谱图至主成分的出峰保留时间的2.5倍以上，用面积归一化法计算含量，结果系统测定样品含量在均98％以上；杂质检查，分别在不同系统记录的色谱图中，除溶剂峰外，杂质峰面积总和结果均小于2.0％。

3.如权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于甜茶素的质量控制还包括薄层色谱检测方法，用甜茶素对照品参比的方法，其色谱条件为，以硅胶G为层析板，分别以乙酸乙酯-丙酮-乙酸-水重量比例8-10:3-5:1-2:1-2为展开剂，氯仿-甲醇-水重量比例15-25:6-10:0.5为展开剂，乙酸乙酯-甲醇-水重量比例12-20:2-5:0.5为展开剂；然后碘显色，置于白光下检视，在薄层色谱中三个展开系统下均为黄色的单一的荧光斑点，则代表纯度符合要求，否则不符合要求。

4.如权利要求3所述的质量控制方法，其特征在于：

取甜茶素样品用甲醇制1mg/ml的溶液，在同一硅胶G上，按不同的点样量梯度点样，点样量分别为20μg、40μg、60μg、80μg、100μg；分别以乙酸乙酯-丙酮-乙酸-水重量比例8:3:1:1；氯仿-甲醇-水重量比例20:6:0.5；乙酸乙酯-甲醇-水重量比例16:3:0.5为展开剂；置展开缸分别展开，展距为15cm，然后碘显色，置于白光下检视，在5个不同浓度的梯度点样及三个展开系统薄层色谱中，均为黄色的单一的荧光斑点。

5.如权利要求1-4任何一项所述的质量控制方法，其特征在于，所述的甜茶素样品由以下方法制备而成：

1)提取：取甜茶干燥叶子，加水提取，浓缩，过滤，经大孔树脂柱层析，用乙醇-水溶液体系进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分含量为40％-80％的洗脱液，合并，浓缩，即得甜茶素粗结晶；

2)精制：用制备型高效液相色谱法分离纯化甜茶素粗结晶，用C-18色谱柱，配合甲醇-水体系进行梯度洗脱，用甲醇-水体系将甜茶素粗结晶溶解后，注入制备型高效液相色谱仪，收集纯度在90％以上的甜茶素溶液，减压浓缩，即得。

6.如权利要求5所述的质量控制方法，其特征在于：

所述步骤1)中，梯度洗脱时分组收集不同浓度的乙醇洗脱液，不同洗脱液采用薄层色谱法检测，用甜茶素对照品参比的方法，其色谱条件为:以硅胶G为层析板，以乙酸乙酯-丙酮-乙酸-水重量比例8-10:3-5:1-2:1-2为展开剂，或者氯仿-甲醇-水重量比例15-25:6-10:0.5为展开剂，或者乙酸乙酯-甲醇-水重量比例12-20:2-5:0.5为展开剂，展距为15cm；碘显色，置于白光下检视，选择在薄层色谱中，黄色单一荧光斑点亮度高的洗脱液，合并，浓缩，即得甜茶素粗结晶。

7.如权利要求5所述的质量控制方法，其特征在于：

所述的步骤2)精制中，分别收集纯度在90％-98％之间和纯度大于98％以上的洗脱液，减压浓缩，得到纯度在90％-98％之间以及大于98％以上的甜茶素。

8.如权利要求5所述的质量控制方法，其特征在于：

所述的步骤2)精制中，收集纯度在90％以上的甜茶素溶液后，采用高效液相色谱法再次测定其纯度，其色谱条件为：

色谱柱为十八烷基键合硅胶填充剂；

分别以乙腈-水体积比为10-90:90-10，甲醇-水体积比为20-80:90-10为流动相；

检测波长205-215nm；

流速为0.5～5毫升/分钟。