[发明专利]猪血白细胞抗菌肽的制备方法

权利要求书

1.一种猪血白细胞抗菌肽的制备方法，其特征在于：它包括以下具体步骤：

（1）猪血采集：从屠宰场采集新鲜猪血加入10%的抗凝剂，充分混匀后用200目滤布过滤，除去纤维和血凝块及其他杂质；

（2）收集白细胞：将收集的抗凝猪血在4℃下高速离心，弃去大部分的上层黄色澄清血浆和底层红细胞，收集中间层即白细胞与血小板和部分血浆与红细胞沉淀；沉淀物中加入3倍体积氯化铵溶液裂解红细胞，4℃下高速离心，弃去上清液，收集沉淀即为白细胞；

（3）萃取：将白细胞中加入10％的醋酸，用料理机进行搅打破碎，染色镜检白细胞是否破碎，若未破碎，重复进行均质破碎，至镜检无完整细胞；4℃超高速离心，收集上清液即为中性粒细胞胞浆内的颗粒组份；4℃下搅拌过夜，萃取得醋酸提取物；

（4）脱酸：将以上方法萃取得到的醋酸提取物，经4℃下高速离心，收集上清液，旋转蒸发除去醋酸和部分水分后，真空冷冻干燥得抗菌肽粗品，密封包装后在-20℃保存；

（5）抗菌肽的纯化：将冻干抗菌肽粗品用0.5%甲醇溶解,再上样于层析柱，同时打开柱的下端出口，收集特征峰洗脱液再真空冷冻干燥得抗菌肽，-20℃保存。

2.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤（1）所述的抗凝剂是10%柠檬酸钠。

3.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤（2）所述的高速离心是3000r／min离心15min。

4.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤（2）所述氯化铵溶液是0.83％氯化铵溶液。

5.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤（3）所述的超高速离心是11000r／min离心40min。

6.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤（4）所述的旋转蒸发是55℃旋转蒸发30min。

7.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤（5）所述的层析柱是葡聚糖凝胶SephadexG25。

8.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤（5）所述的特征峰洗脱液是指在280nm处有吸收峰的洗脱液。

9.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述的真空冷冻干燥得温度为-50--60℃，冷冻干燥的时间为24h-48h。