[发明专利]一种基于二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的免疫传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种基于二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）依次用1.0、0.3、0.05 μm的氧化铝粉末对玻碳电极进行抛光，分别在超纯水和乙醇中超声清洗，氮气吹干，在电极表面滴加6 μL、1~3 mg/mL的三氨丙基三乙氧基硅烷功能化的石墨烯水溶液，干燥；

（2）继续将6 μL浓度为8 ~ 12 μg/mL的甲胎蛋白捕获抗体溶液滴加到修饰电极表面，于4℃冰箱中孵化1 h，清洗干净；

（3）用3 μL浓度为5 ~ 15 mg/mL的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点，于4℃冰箱中孵化1 h，清洗干净；

（4）将6 μL浓度为0.000005 ~ 10 ng/mL的一系列不同浓度的甲胎蛋白用于和捕获抗体的特异性识别，室温下孵化1 h，清洗干净；

（5）将6 μL浓度为1 ~ 3 mg/mL的二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体溶液滴在电极上与抗原特异性识别，室温下孵化1 h，清洗干净，于4℃冰箱中储存备用。

2.如权利要求1所述的一种基于二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的免疫传感器的制备方法，所述二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体溶液的制备，其特征在于，包括以下步骤：

（1）氧化亚铜立方纳米框架的制备

首先，将8.32 ~ 16.64 mL超纯水、0.50 ~ 1.00 mL浓度为0.1 mmol/L的氯化铜溶液和0.087 ~ 0.174 g十二烷基硫酸钠在持续搅拌下混合，将装有该混合液的玻璃瓶放在温度为32~34℃的水浴中，当十二烷基硫酸钠粉末完全溶解后，加入0.18 ~ 0.36 mL浓度为1.0 mmol/L 的氢氧化钠溶液，该溶液立刻变为明亮的蓝色，表明生成了氢氧化铜沉淀，然后，在1 s内将0.92 ~1.84 mL浓度为0.1 mmol/L的盐酸羟胺溶液立刻注入玻璃瓶，搅拌20 s，在几秒钟之内溶液立即从亮蓝色变成了绿色，最后， 加入0.08 ~ 0.16 mL浓度为1.0 mmol/L的盐酸溶液，继续搅拌20 s，在几秒钟之内溶液的颜色由绿色变为黄色，溶液的全部体积为10 ~ 20 mL，将该溶液在水浴中老化1 h用于纳米晶体的生长，将3 ~ 6 mL体积分数为95%的乙醇加入到溶液中，静置1 h后超声1 min，清晰的淡黄色变为絮状，将该样品在5000 rpm下离心3 min，去除顶层溶液，沉淀用10 ~ 20 mL体积比为1:1的水和乙醇清洗，最后用5 ~ 10 mL的乙醇清洗，离心后干燥;

（2）二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体溶液的制备

将1 ~ 2 mL浓度为2 mg/mL的氧化亚铜立方纳米框架溶液、1 ~ 2 mL的浓度为2 mg/mL二茂铁溶液、1 ~ 2 mL1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(10 mmol/L)/N-羟基琥珀酰亚胺(2 mmol/L)和1 ~ 2 mL浓度为10 μg/mL甲胎蛋白检测抗体混合，震荡12 h，离心洗涤，将得到的二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体孵化物分散于1 mL、pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，将制得的二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的甲胎蛋白检测抗体溶液，于4℃冰箱中储存备用。

3.如权利要求1所述的制备方法制备的一种基于二茂铁-氧化亚铜立方纳米框架标记的免疫传感器，其特征在于，用于甲胎蛋白的检测，检测步骤如下：

（1）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，所制备的免疫传感器为工作电极，在10 mL的pH值为6.8的磷酸盐缓冲溶液中进行测试；

（2）选择计时电流法对甲胎蛋白进行检测，将输入电压设置为-0.4 V，取样间隔设置为0.1 s，运行时间设置为400 s；

（3）当背景电流趋于稳定后，每隔50 s向磷酸盐缓冲溶液中注入10 μL浓度为10 mol/L的双氧水溶液，然后记录电流随时间的变化，绘制工作曲线；

（4）将待测样品溶液代替甲胎蛋白标准溶液进行检测。