[发明专利]一种用于饲用屎肠球菌冻干制剂的保护剂及制备方法

权利要求书

1.一种用于饲用屎肠球菌真空冷冻干燥的保护剂，所述饲用屎肠球菌为屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746，所述保护剂的主要成分及含量(质量百分比)如下：脱脂奶粉5-15％，山梨醇1-3％，甘氨酸0.02-0.2％，低聚半乳糖0.2-2％，麦芽糖0.2-2％，其余成分为蒸馏水。

2.权利要求1所述的保护剂，其特征在于配制方法如下：

称取50-150g脱脂奶粉，10-30g山梨醇，2-20g低聚半乳糖和2-20g麦芽糖溶于蒸馏水中，定容至990mL，115℃灭菌20min；称取2-20g甘氨酸溶于蒸馏水中，定容至100mL，过滤除菌后，取10mL加入到上述灭菌的保护剂溶液中，混合后待用。

3.权利要求1所述的保护剂，其特征在于保护剂与菌泥的混合比例为：每克菌泥加入3-5mL保护剂。

4.权利要求1-3所述的保护剂用于制备屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746冻干制剂的方法，其特征在于主要步骤如下：

(1)高密度发酵后的屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746经管式离心机在10000-15000rpm条件下离心收集菌体；

(2)将保护剂与菌泥混合后置于匀浆机中，2800rpm匀浆5min；

(3)将匀浆液置于不锈钢托盘中(每盘中匀浆液厚度不高于2厘米)，-80℃预冻4-6h后放入冻干机中进行真空冷冻干燥，冻干程序如下：-40℃条件下3h，之后每隔3h温度升高5℃，并在该温度下维持3h，直至温度升至25℃，在25℃条件下保持5h后冻干结束；

(4)冻干后的固体粉碎后装入样品袋保存，并于-20℃或常温贮藏。

5.权利要求1-3所述的保护剂用于制备屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746冻干制剂的方法，其特征在于主要步骤如下：

(1)高密度发酵后的屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746经管式离心机在10000-15000rpm条件下离心收集菌体；

(2)将保护剂与菌泥混合后置于匀浆机中，2800rpm匀浆5min；

(3)将匀浆液用5毫升枪头逐滴滴加入盛有液氮的容器中，使之冷冻成为球状，待液氮完全挥发后，将冷冻的球状物转至不锈钢托盘中，放入冻干机中进行真空冷冻干燥，冻干程序如下：-40℃条件下3h，之后每隔3h温度升高5℃，并在该温度下维持3h，直至温度升至25℃，在25℃条件下保持5h后冻干结束；

(4)冻干后的固体粉碎后装入样品袋保存，并于-20℃或常温贮藏。