[发明专利]一种中药组合物的指纹图谱的建立方法

说明书

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种中药组合物的指纹图谱的建立方法，所述中药组合物为咳喘顺丸。

背景技术

基于中医药理论的中药组合物(中成药)，药味组成一般比较繁多；在药物组合物的制备过程中，不同成分之间还可能相互发生反应，导致药物组合物的成分更加复杂。仅靠定性或定量检测其中某个或某几个成分，由于信息量有限，难以体现组合物作为整体的化学特征。随着现代分析技术的发展，指纹图谱已经是当今国际公认的控制中药质量的质控模式。

中药组合物指纹图谱的建立，应以系统的化学成分研究和药理学研究为依托，体现系统性、特征性和稳定性三个基本原则。才能保证指纹图谱的标准化、规范化、客观化，从而便于推广和应用。高效液相色谱法(HPLC)具有分离效率高，分析速度快，定量精密度高，检测器种类多，稳定性好等特点。不受样品挥发度和热稳定性的限制，样品中大多数成分均可在高效液相色谱仪上进行分析检测，是构建指纹图谱的主要方法之一。2010版《中国药典》收载了中成药品种共计1069个，但是仅收载了高效液相指纹图谱13项，其中提取物14项，中成药仅6项。可见中成药指纹图谱的建立，绝非易事，需要解决众多的技术问题，花费大量的劳动。

咳喘顺丸收载于2010年版《中国药典》一部第887页，其原料由陈皮、前胡、瓜蒌仁、半夏、紫菀、桑白皮、紫苏子、苦杏仁、款冬花、鱼腥草、茯苓和甘草12味中药材组成，主治痰湿蕴肺引起的咳嗽，喘息等病症。目前对咳喘顺丸的物质基础研究较少，且实验结果都不能全面的反映咳喘顺丸中的有效化学信息，因此这些研究结果不能很好的用于咳喘顺丸的质量控制。

发明内容

针对上述问题，本发明的一个目的在于提供一种中药组合物指纹图谱的建立方法，其中所述中药组合物为咳喘顺丸。本发明利用HPLC-UV技术，找出具有特征的色谱指纹特性，体现了苦杏仁苷、橙皮苷、白花前胡甲素、白花前胡乙素为指标的主要特征，从而可以用这些指标成分来检测咳喘顺丸中苦杏仁、陈皮、前胡药材的投料情况，并且提供了比常规质量标准更深层次的质量评价依据。

为了实现上述发明目的，本发明采用了如下的技术方案：

一种中药组合物的指纹图谱建立方法，所述中药组合物的原料组成为：陈皮、前胡、瓜蒌仁、半夏、紫菀、桑白皮、紫苏子、苦杏仁、款冬花、鱼腥草、茯苓和甘草，通过本领域常用的方法，与药学上可以接受的辅料，制备成临床上可以接受的制剂；所述方法包括采用高效液相色谱法检测所述中药组合物中各类化合物的保留时间，其中所述高效液相色谱的条件如下：

色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；

流动相为体积比为5:95～95:5的乙腈和重量百分浓度0.1％的磷酸水溶液组成的梯度洗脱系统，流速为0.5～1.5mL/min，优选为1ml/min

柱温为25～40℃，优选为30℃；

紫外检测波长为225nm。

优选的，所述方法的流动相梯度洗脱条件为：

0～50min，乙腈的体积百分比为5％→30％，所述0.1％磷酸水溶液的体积百分比为95％→70％；

50～120min，乙腈的体积百分比为30％→95％，所述0.1％磷酸水溶液的体积百分比为70％→5％。

优选的，所述方法包括通过以下方法制备供试品溶液：取所述中药组合物3g，粉碎，精密称定，置于50ml的锥形瓶中，精密加25ml甲醇，超声30min后，放冷至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

作为一个优选的实施方式，本发明提供一种所述中药组合物的指纹图谱建立方法，所述方法具体的操作步骤包括：

1)供试品溶液的制备：取咳喘顺丸3g，粉碎，精密称定，置于50ml的锥形瓶中，精密加25ml甲醇，超声30min后，放冷至室温，既得；

2)测定：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，根据以下色谱条件进行测定，得到指纹图谱：

色谱柱：Agilent SB-C18，250×4.6mm，固定相平均粒径5μm；

流动相：体积比为5:95～95:5的乙腈和体积百分浓度0.1％的磷酸水溶液，按照如下程序进行梯度洗脱：

0～50min，乙腈的体积百分比为5％→30％，所述0.1％磷酸水溶液的体积百分比为95％→70％；

50～120min，乙腈的体积百分比为30％→95％，所述0.1％磷酸水溶液的体积百分比为70％→5％；

流速：1.0mL/min；