[发明专利]遗传性血管水肿的检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及检测试剂盒领域，具体地说，涉及一种遗传性血管水 肿的检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

遗传性血管水肿(hereditaryangioedema，HAE)是一种以反复 发作的皮下和(或)黏膜下水肿为主要表现的罕见遗传性疾病。水肿 为自发性或由某些因素诱发，具有局限性、非凹陷性、自限性的特点。 常见受累部位包括颜面部、四肢、消化道及上呼吸道黏膜。

典型的HAE是由补体C1酯酶抑制剂(C1inhibitor，C1-INH)基 因突变导致的C1-INH量的减少和(或)功能缺乏所致。遗传性血管 水肿是一种常染色体先行遗传病，发病率1/50000。

由于HAE发病率低，临床上易发生误诊、误治。该疾病的诊断除 需要了解家族史和根据典型的临床表现外，主要依赖于实验室对 C1-INH功能活性检测。近年来，国外较多推荐采用比色法对C1-INH 的功能进行检测。但比色法的灵敏度和特异性较低，且操作较复杂， 用时较长。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种遗传 性血管水肿的检测试剂盒及其制备方法。

为了实现本发明目的，本发明首先提供一种遗传性血管水肿的检 测试剂盒，所述试剂盒包括：包被抗人C1-INH抗体的载体、生物素 标记的C1-INH校准品、链霉亲和素偶联的辣根过氧化酶试剂、化学 发光底物液A和B以及洗涤液。

进一步地，所述载体为化学发光板或磁珠微粒。

进一步地，所述抗人C1-INH抗体选自鼠抗人C1-INH单克隆抗体、 兔抗人C1-INH多克隆抗体、羊抗人C1-INH的多克隆抗体、鸡抗人 C1-INH多克隆抗体中的一种或多种。

作为优选，所述抗人C1-INH抗体选自鼠抗人C1-INH单克隆抗体。

进一步地，所述鼠抗人C1-INH单克隆抗体的纯度不小于95％，浓 度不小于1mg/mL。

作为优选，所述抗人C1-INH抗体浓度为5μg/mL。

本发明还提供了所述试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

(1)包被抗人C1-INH抗体的载体的制备：

包被抗人C1INH抗体的96孔化学发光板：将包被用抗人C1-INH 抗体加至碳酸盐缓冲液中混匀，加入微孔板内，每孔100μL，包被浓 度1～5μg/mL，4℃过夜，用含Tween20的磷酸盐缓冲液洗涤微孔板 2遍后，再加入含有BSA的磷酸盐缓冲液，室温静置2小时后，弃 去孔内液体，彻底干燥发光板，于铝箔袋真空包装，放2-8℃保存；

或包被抗人C1-INH抗体的磁珠微粒：将直径0.15μm的磁珠微 粒用戊二醛活化，室温混匀2～5小时候，用0.01mol/LPBS缓冲液 冲洗4次，并将该溶液进行悬浮，浓度为0.1mg/mL～2.5mg/mL；然 后，每毫升悬液中加入抗人C1-INH抗体10μg，于20～40℃混匀孵 育3～10小时；用等体积的0.01MPBS2％～5％BSApH7.0～7.4缓冲 液于20～40℃孵育2～8小时；最后，用2％BSA0.01～0.1MTris-HCl pH7.5～pH9.0缓冲液清洗三次，并用该溶液配制成磁珠微粒浓度 0.1～1.0mg/mL，即得；

(2)生物素标记的C1-INH校准品的制备：将C1-INH用0.1 mol/L，pH8.0的碳酸氢钠缓冲液或0.5mol/L，pH8.6的硼酸缓冲液 稀释到1mg/mL，并用0.1mol/L，pH8.0的碳酸氢钠缓冲液或0.5 mol/L，pH8.6的硼酸缓冲液，对蛋白质充分透析；用1mLDMSO溶 解NHSB1mg；向1mLC1-INH溶液(即含蛋白质1mg)加入120μl NHSB溶液(即含NHSB120μg)；在室温下持续搅拌，保温2-4小 时；加入9.6μL1mol/LNH₄Cl(每25μgNHSB加1μl)，在室温下搅 拌10分钟；在4℃，对PBS充分透析，以除去游离的生物素；将样 品上1mL的分子筛柱，以PBS缓慢洗脱，收集1mL/管，蛋白质在 1-3mL之间洗下；最后，样品加入叠氮钠(终浓度0.5g/L)及1.0g/LBSA. 将结合产物置4℃，避光保存；