[发明专利]一种从酿酒酵母中提取纯化SOD的方法

权利要求书

1.一种从酿酒酵母中提取纯化SOD的方法，其特征在于其包括下述操作步骤：

1）菌体收集：用板框过滤器收集湿酿酒酵母细胞；

2）菌体匀浆：将上述酿酒酵母细胞中加入2~30倍体积的水，搅拌使酿酒酵母均匀分散为悬浮液，用高压均质机在300~1500bar匀浆2~8次；

3）粗酶液制备：向匀浆后产物加入pH7~9的聚醚酰亚胺溶液，使聚醚酰亚胺的终浓度为1~25g/L；搅拌均匀后加入硅藻土，硅藻土的加入量为每升100~300克；混合均匀后用板框过滤器过滤收集滤液，即为SOD粗酶液；

或将匀浆后产物以10000~16000rpm离心，上清液用陶瓷膜微滤系统过滤得到SOD粗酶液；

4）超滤：将上述SOD粗酶液用1000~40000 Da超滤膜处理，超滤膜两侧压力不大于0.4MPa；

5）层析：将上述超滤后所得滤液通过阳离子层析柱层析，用去离子水冲洗后用5~100mM的pH4.0~7.0乙酸缓冲液进行洗脱，收集富含SOD的洗脱液；所述阳离子层析柱选自Q-sepharose或DEAE-sepharose层析柱。

2.根据权利要求1所述的一种从酿酒酵母中提取纯化SOD的方法，其特征在于

向步骤5）中的超滤后所得滤液中加入pH 5.0~7.0的乙酸缓冲液，使乙酸的终浓度为5~30mM的后进行层析。

3.根据权利要求2所述的一种从酿酒酵母中提取纯化SOD的方法，其特征在于所述乙酸缓冲液为乙酸-乙酸钠缓冲液。

4.根据权利要求1或2所述的一种从酿酒酵母中提取纯化SOD的方法，其特征在于层析后将所得富含SOD的洗脱液通过超滤或凝胶排阻层析脱盐。

5.根据权利要求1或2所述的一种从酿酒酵母中提取纯化SOD的方法，其特征在于重复步骤4）和5）2~5次获得高纯度的富含SOD的洗脱液。

6.根据权利要求5所述的一种从酿酒酵母中提取纯化SOD的方法，其特征在于步骤2）中所述水的温度为4~15℃。