[发明专利]转基因玉米的多重PCR筛查检测引物及检测方法有效
| 申请号： | 201410756727.2 | 申请日： | 2014-12-11 |
| 公开（公告）号： | CN104404161A | 公开（公告）日： | 2015-03-11 |
| 发明（设计）人： | 尹全;宋君;刘勇;雷绍荣;郭灵安;王东;张富丽;刘文娟;常丽娟 | 申请（专利权）人： | 四川省农业科学院分析测试中心 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 成都顶峰专利事务所(普通合伙) 51224 | 代理人： | 杨俊华 |
| 地址： | 610000 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 转基因 玉米 多重 pcr 检测 引物 方法 | ||
1.转基因玉米的多重PCR筛查检测引物，其特征在于，包括以下引物序列：
二重PCR引物序列：
P-CaMV 35S-F：5'-GCTCCTACAAATGCCATCATTGC-3'；
P-CaMV 35S-R：5'-GATAGTGGGATTGTGCGTCATCCC-3'；
T-NOS-F：5'-TGAATCCTGTTGCCGGTCTT-3'；
T-NOS-R：5'-AAATGTATAATTGCGGGACTCTAATC-3'。
2. 转基因玉米的多重PCR筛查检测引物，其特征在于，包括以下引物序列：
六重PCR引物序列：
P-ract1-F：5'-AGTCCAAAATAAAACAAAGGTAAGAT-3'；
P-ract1-R：5'-TTCACTTTGGGCCACCTTT-3'；
T-NOS-F：5'-TGAATCCTGTTGCCGGTCTT-3'；
T-NOS-R：5'-AAATGTATAATTGCGGGACTCTAATC-3'；
P-CaMV 35S-F：5'-GCTCCTACAAATGCCATCATTGC-3'；
P-CaMV 35S-R：5'-GATAGTGGGATTGTGCGTCATCCC-3'；
bar-F：5'-GAAGGCACGCAACGCCTACGA-3'；
bar-R：5'-CCAGAAACCCACGTCATGCCA-3'；
pat-F：5'-GAAGGCTAGGAACGCTTACGA-3'；
pat-R：5'-CCAAAAACCAACATCATGCCA-3'；
PMI-F：5'-TTCTGAAATCGGTTTTGCCAA-3'；
PMI-R：5'-TCAGCAATAGCGGGGAGAA-3'。
3. 转基因玉米的多重PCR筛查检测方法，其特征在于，包括以下步骤：二重PCR检测方法：
（a1）合成以下引物：
P-CaMV 35S-F：5'-GCTCCTACAAATGCCATCATTGC-3'；
P-CaMV 35S-R：5'-GATAGTGGGATTGTGCGTCATCCC-3'；
T-NOS-F：5'-TGAATCCTGTTGCCGGTCTT-3'；
T-NOS-R：5'-AAATGTATAATTGCGGGACTCTAATC-3'；
（a2）制备待测玉米的DNA稀释液；
（a3）配制PCR反应体系；
（a4）进行PCR反应；
（a5）取PCR反应产物进行毛细管电泳。
4. 根据权利要求3所述转基因玉米的多重PCR筛查检测方法，其特征在于，步骤（a3）中所述的配制PCR反应体系总体积为25μL；具体含以下组分：PCR Master Mix（2X）、DNA稀释液、步骤（a1）中的各引物、ddH2O；其中PCR Master Mix（2X）的加入量为12.5μL，DNA稀释液加入量为2.0μL，各引物加入后的终浓度均为0.2μM，采用ddH2O补足25μL。
5. 根据权利要求4所述转基因玉米的多重PCR筛查检测方法，其特征在于，所述PCR反应条件为：94℃变性5min，然后进入35个循环；94℃30s，58℃30s，72℃30s；循环结束后72℃延伸5min。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于四川省农业科学院分析测试中心，未经四川省农业科学院分析测试中心许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201410756727.2/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
