[发明专利]尖孢镰刀菌发酵生产脂肪酶用培养基及其培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种尖孢镰刀菌Fusarium Oxysporum_SHM发酵生产用培养基及其培养方法。

背景技术

脂肪酶（lipase E.C. 3.1.1.3）是一种分解脂肪的酶类，又称甘油三酯水解酶。脂肪酶广泛存在于自然界中，微生物、植物以及人和其它动物都可以产生脂肪酶。人和其它动物产生脂肪酶主要是为了对油脂进行消化、吸收和转换为其它必须物质；植物产生脂肪酶用来构成茉莉酸防疫体系以及用来诱导水杨酸生成；微生物脂肪酶用来水解油脂产生脂肪酸，脂肪酸再进入β氧化途径从而提供能量，并且对油脂的储存也起到相应的作用。

脂肪酶广泛应用于脂肪的生产工艺、去污剂和脱脂业、食品工艺、精细化学品合成业、造纸业、化妆品制造业以及制药业中，脂肪酶还可用于油脂垃圾和聚氨酯的快速降解。筛选出高产脂肪酶的菌株并且优化得到脂肪酶产量最高的营养条件无疑具有很重要的应用价值。

尖孢镰刀菌属于丛梗孢科（Monilianceae）镰孢菌属（Fusarium LK），是一种脂肪酶高产菌株，同时是一种对人畜无害的真菌，因此在脂肪酶工业化生产上有很大的潜力。国内外对尖孢镰刀菌脂肪酶研究还处在起步阶段。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种尖孢镰刀菌Fusarium Oxysporum_SHM发酵产生脂肪酶用培养基。

本发明的目的之二在于提供采用该培养基培养脂肪酶的方法。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种尖孢镰刀菌发酵产生脂肪酶用培养基，其特征在于该培养基的组份及各组份的浓度为：基础培养基中加入1~2%亚麻籽油为诱导剂，5.0~ 10.0g/L蔗糖为碳源，30.0~35.0 g/L胰蛋白胨为氮源，调pH为6.5~8.0。

上述的基础培养基成分为：0.5 g/L MgSO₄7H₂O，2.0 g/L K₂HPO₄。

一种尖孢镰刀菌发酵产生脂肪酶的培养方法，采用上述的培养基，其特征在于该方法的具体步骤为：装液量控制在25.0~30.0 mL/250 mL，30℃，180 rpm培养4 d完成发酵。

本发明采用单因素分析法，研究不同的诱导剂、碳源、碳源浓度、氮源、氮源浓度、pH和装液量对发酵产脂肪酶活力的影响，先确定各个显著影响因素的范围，然后采用4因素5水平响应面分析法，确定尖孢镰刀菌Fusarium Oxysporum_SHM为最佳的发酵条件。

在本发明条件下，预测发酵产脂肪酶活力为5566.85 U/mL，实际测得发酵产酶活力为5216.23 U/mL，与模型预测接近最后测定发酵曲线判断Fusarium Oxysporum_SHM发酵产酶规律。

本发明新颖之处和优点在于：

1)        首次对自主筛选的脂肪酶高产尖孢镰刀菌Fusarium Oxysporum_SHM发酵条件进行优化，并且使酶活力从发酵基础培养基的93.42 U/mL提高到5216.23 U/mL；

2)        针对油脂诱导微生物产脂肪酶的特性，较全面探索了11种脂肪酸种类不同油脂对菌株发酵产酶的影响；

3)        运用SPSS分析，从大量数据结果中获得最优解；

4)        考虑到发酵条件各显著因素的交互作用，先通过单因素实验确定具体水平范围，再通过4因素5水平响应面分析，得到Fusarium Oxysporum_SHM发酵产酶的最佳条件；

5)        尖孢镰刀菌作为一种对人体无害的微生物，有很大的工业生产应用价值。关于高产脂肪酶尖孢镰刀菌条件优化报道并不多。

附图说明

图1为油脂对Fusarium Oxysporum_SHM发酵产胞外脂肪酶和菌体生长的影响。

图2为不同碳源对Fusarium Oxysporum_SHM发酵产胞外脂肪酶和菌体生长的影响。

图3为不同蔗糖浓度对Fusarium Oxysporum_SHM发酵产脂肪酶活力和菌体生长的影响。

图4为不同氮源对Fusarium Oxysporum_SHM发酵产胞外脂肪酶活力和菌体生长的影响。