[发明专利]一种适用于玉米赤霉烯酮及其代谢物的在线测定方法

说明书

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种适用于玉米赤霉烯酮及其代谢物在线富集及分离的毛细管电色谱测定方法。

背景技术

玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEN）是由禾谷镰刀菌、三线镰刀菌及串珠镰刀菌等产生的一类真菌毒素，主要包括β-玉米赤霉醇（β-ZOL）、α-玉米赤霉烯醇（α-ZAL）、β-玉米赤霉烯醇（β-ZAL）、玉米赤霉酮（ZAN）等，常见于粮食及动物组织中，可经饮用水和食物对人体健康造成影响，多国已禁止其用于动物食品，在所有食用的组织中不得检出。

关于玉米赤霉烯酮毒素的检测，国内外已建立了多种方法，主要为高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱质谱联用法（GC-MS）、液相色谱和质谱联用法（LC-MS）和ELISA方法。气相/液相色谱检测技术通常需要离柱富集，难于直接对痕量玉米赤霉烯酮毒素进行检测；质谱联用技术需要借助富集净化处理技术。固相柱萃取（SPE）、酶联免疫吸附萃取、搅拌吸附萃取等富集时间长，常规色谱在柱富集洗脱流程的压力衰减梯度大、容易产生区带展宽，对于含量极低的玉米赤霉烯酮毒素的分析而言，损失误差大，难以实现准确检测。另外，由于玉米赤霉烯酮毒素不带电荷，高效毛细管电泳方法对其分离不起作用。

毛细管电色谱（CEC），包括毛细管功能柱，作为新兴的分析技术，为高效分离提供了极好的契机。毛细管柱固定相结构稳定，洗脱柱压高、速度快，区带扩散效应小，具有分离快速、高效、高容量的特点，多面体低聚倍半硅氧烷作为一种新型立体结构的功能材料，拥有纳米孔笼状构型，吸附作用强、生物兼容性良好，对痕量样品在柱高效富集及连续分离具有明显优势；在CEC中，溶质运输不仅存在固定相和流动相间的分配作用，而且受到电渗流的驱动作用，其分离综合了高压电场驱动和微流液相分配的双重作用，有利于待测物质的在柱富集和连续分离。

发明内容

本发明的目的在于提供一种适用于玉米赤霉烯酮及其代谢物在线富集及分离的毛细管电色谱测定方法，该方法流程连续、高效，无需进行组分离线处理，灵敏度高，可用于玉米赤霉烯酮及其代谢物的痕量自动化分析。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种适用于玉米赤霉烯酮及其代谢物的在线测定方法，是利用毛细管电色谱技术，以十八烷基键合硅胶毛细管填充柱，或由乙烯基苄氯为功能单体、笼型八乙烯基倍半硅氧烷为交联剂组成的聚合物整体柱制成有机-硅胶杂化毛细管整体柱，在所用的有机-硅胶杂化毛细管整体柱上同时施加负电荷高压电场和液相泵辅助压力，在高压电场驱动和毛细管微流液相分配分离的双重作用下实现玉米赤霉烯酮及其代谢物的在柱富集和多组分连续分离，从而实现对玉米赤霉烯酮及其代谢物的定量分析。

所述玉米赤霉烯酮及其代谢物包括玉米赤霉烯酮、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉醇、玉米赤霉酮。

应用十八烷基键合硅胶毛细管填充柱进行分析的具体条件包括：以体积比11：89的乙腈、水混合溶液配制样品，进样体积300 μL；以体积比83：17的甲醇、乙酸铵-氨水缓冲溶液的混合溶液为流动相，分离电压-15kV，液相泵辅助压力1000 psi，流速0.02 mL/min。

应用以乙烯基苄氯为功能单体、笼型八乙烯基倍半硅氧烷为交联剂组成的聚合物整体柱进行分析的具体条件包括：以体积比为11：89的乙腈、水混合溶液配制样品，进样体积300 μL；以体积比90：10的甲醇、乙酸铵-氨水缓冲溶液的混合溶液为流动相，分离电压-18kV，液相泵辅助压力1000 psi，流速0.02 mL/min。

所述乙酸铵-氨水缓冲溶液的pH值为7.50，其中乙酸铵的浓度为1.00 mmol/L。

所述以乙烯基苄氯为功能单体、笼型八乙烯基倍半硅氧烷为交联剂组成的聚合物整体柱的制备方法包括以下步骤：

1）将乙烯基苄氯、笼型八乙烯基倍半硅氧烷、引发剂和致孔剂混合配制成聚合反应溶液，在氮气气氛中于室温下超声处理15 min；

2）在室温下将超声处理后的聚合反应溶液均匀注入乙烯基衍生化处理的石英毛细管，密封，在60℃条件下加热反应12小时；

3）将二氯乙烷以0.25 L/min的流速冲洗步骤2）得到的聚合物整体柱2小时，然后以0.25 L/min的流速通入过滤的、三氯化铁饱和的二氯乙烷溶液2小时，再以冰水冷却1小时，在80℃条件下加热连续反应2小时，得到所述聚合物整体柱。