[发明专利]一种枇杷自交亲和品种快速鉴定分子标记、标记引物及鉴定方法

说明书

技术领域

本发明属于分子标记领域，涉及一种枇杷品种(系)自交亲和S-RNase基因型S_i分子标记，自交亲和标记引物和枇杷自交亲和品种快速鉴定方法。

背景技术

枇杷(Eriobotrya Lind1.)属配子体型自交不亲和(Gametophyticself-incompati bility，GSI)，遗传上属于受单一位点(S-locus，S位点)的复等位基因(S-allele or S-gene，S基因)调控，当花粉的S等位基因与花柱中S等位基因之一相同时，花粉管在花柱中的生长就会受到抑制，从而无法顺利完成受精作用而表现出自交不亲和现象，严重影响果实产量。因此在栽培中必需配植合理的授粉品种或进行科学的花期人工辅助授粉，方能获得稳定的产量与品质。这种方法虽然直观有效，但是不仅费时费力，而且盲目性比较大，从而影响提高枇杷的品质。

如果能找到自交亲和品种的枇杷，并能有效而快速地鉴定出来，就不需要配置授粉树或进行人工授粉，可以大大地节约人工和生产成本，对提高枇杷的产量和品质有很大的意义。

枇杷自交亲和品种的鉴定是一项长期的应用基础性研究工作，随着新品种的不断育成和推广，需要探索出一种可以快速鉴定出枇杷自交亲和品种的方法，这不仅能够为研究枇杷自交不亲和性机理提供有益的试材，而且能够为生产提供切实的帮助。然而，从现有的鉴定方法而言，主要是靠田间品种的套袋自交座果率高低来确定，虽然直观有效，但是工作量大，周期长。

在分子生物学领域，早在1952年，Lewis在月见草中发现了与特定S等位基因相关的蛋白质，此后，有人从茄科等植物中发现含量丰富并与S位点遗传连锁的花柱糖蛋白。近20年来，随着分子生物学的迅速发展，现已从多种配子体型植物中分离了近百个S核酸酶。根据DNA和氨基酸序列比较的结果，发现它们与真菌RNaseRh和RNaseTZ同源，且含有相同的活性部位，具有核酸酶活性，故而常称为S-核酸酶(S-RNase)。S-RNase一般为250个氨基酸左右。比较S-RNase的蛋白质序列发现它们之间有数个保守区和两个高变区，高变区Hva和Hvb多数为S一蛋白的亲水区域，可能与S-RNase的识别有关。保守区可能与S-RNase的活性和结构有关。作为一类分泌型糖蛋白，S-RNase在雌蕊中特异表达，主要分布在花柱传递组织的细胞间隙中，在花柱1/3以上部位的浓度最高，该部位正是自交不亲和花粉生长受到抑制最强列的区域。在包围胚珠的胎座表皮细胞中检测到了低水平的S-RNase的表达。由此可见，在花粉管进入胚珠必须通过的组织中均有S-RNase的表达，它的分布位置与花粉管伸长的途径相一致。只有S-RNase的浓度达到一定的阀值，自交不亲和才能发生，S-蛋白的表达量与花的发育过程显著相关。一般来说，S-RNase与s-位点共分离本身并不能证明它一定是S基因产物，因为可能是与S基因紧密连锁基因的表达产物。但是，目前已有有利证据证明S-RNase就是S位点在花柱中的产物。S-蛋白序列表现出高度的差异性，这些序列的多态性为分子识别提供了可能。

但是，目前对于通过鉴定品种的S基因型认识不同，并且检测设备、技术条件要求高，使枇杷品种的自交亲和品种鉴定进展一直十分缓慢，因此，枇杷的自交亲和品种鉴定是一个极其薄弱而又急待加强的研究领域。

发明内容

针对现有技术中枇杷的自交亲和品种的鉴定时间长、技术薄弱等问题，本发明通过提供一种枇杷品种(系)自交亲和S-RNase基因型Si分子标记、标记引物及枇杷自交亲和品种快速鉴定方法，适用于枇杷自交亲和性(S基因型)品种(系)的鉴定、指导育种亲本的选择。

本发明的目的通过以下技术手段获得：

1、本发明提供一种枇杷自交亲和品种快速鉴定分子标记，该分子标记为枇杷S-RNase基因型S_i，序列如SEQ ID NO.1所示，大小为830bp。

2、本发明还提供一种枇杷自交亲和品种快速鉴定分子标记引物，该标记引物AS-PCR序列如下：正向引物序列如SEQ ID NO.2；反向引物序列如SEQ ID NO.3所示。