[发明专利]一种枇杷自交亲和品种快速鉴定分子标记、标记引物及鉴定方法有效

专利信息
申请号: 201410742192.3 申请日: 2014-12-08
公开(公告)号: CN104404156A 公开(公告)日: 2015-03-11
发明(设计)人: 王三红;汪茜 申请(专利权)人: 南京农业大学
主分类号: C12Q1/68 分类号: C12Q1/68;C12N15/29;C12N15/11
代理公司: 南京天华专利代理有限责任公司 32218 代理人: 徐冬涛
地址: 211225 江苏省南京市溧*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 一种 枇杷 亲和 品种 快速 鉴定 分子 标记 引物 方法
【权利要求书】:

1.一种枇杷自交亲和品种快速鉴定分子标记,其特征在于:该分子标记为枇杷S-RNase基因型Si,序列如SEQ ID NO.1所示,大小为830bp。

2.一种枇杷自交亲和品种快速鉴定分子标记引物,其特征在于:该标记引物AS-PCR序列如下:正向引物序列如SEQ ID NO.2;反向引物序列如SEQ ID NO.3所示。

3.一种枇杷自交亲和品种快速鉴定方法,其特征在于:该鉴定方法以枇杷S-RNase基因型Si作为分子标记,其序列如SEQ ID NO.1所示;以Si分子标记引物:正向引物序列如SEQ ID NO.2;反向引物序列如SEQ ID NO.3所示,进行筛选,AS-PCR扩增不同枇杷品种DNA,可扩增出830bp的扩增片段,标志着枇杷S-RNase基因型Si的存在,说明该枇杷品种为自交亲和品种。

4.权利要求3所述的枇杷自交亲和品种快速鉴定方法,其特征在于:25μL AS-PCR扩增反应体系中含有10×PCR buffer 2.5±0.25μL,2.5mmol·L-1的dNTPs2.0±0.2μL,2.5mmol·L-1的MgCl22.0±0.2μL,1U Tap DNA聚合酶1±0.1μL,5pmol·μL-1的AS-PCR上、下游引物1±0.1μL。

5.权利要求3所述的枇杷自交亲和品种快速鉴定方法,其特征是:扩增热循环参数为:94℃预变性2min,然后94℃变性15s,55℃退火30s,70℃延伸2min,共30个循环,最后70℃延伸7min。

6.权利要求3所述的枇杷自交亲和品种快速鉴定方法,其特征是:标记引物扩增产物经2%的琼脂糖凝胶电泳检测。

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