[发明专利]一种枇杷自交亲和品种快速鉴定分子标记、标记引物及鉴定方法有效
| 申请号: | 201410742192.3 | 申请日: | 2014-12-08 |
| 公开(公告)号: | CN104404156A | 公开(公告)日: | 2015-03-11 |
| 发明(设计)人: | 王三红;汪茜 | 申请(专利权)人: | 南京农业大学 |
| 主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12N15/29;C12N15/11 |
| 代理公司: | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人: | 徐冬涛 |
| 地址: | 211225 江苏省南京市溧*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 枇杷 亲和 品种 快速 鉴定 分子 标记 引物 方法 | ||
1.一种枇杷自交亲和品种快速鉴定分子标记,其特征在于:该分子标记为枇杷S-RNase基因型Si,序列如SEQ ID NO.1所示,大小为830bp。
2.一种枇杷自交亲和品种快速鉴定分子标记引物,其特征在于:该标记引物AS-PCR序列如下:正向引物序列如SEQ ID NO.2;反向引物序列如SEQ ID NO.3所示。
3.一种枇杷自交亲和品种快速鉴定方法,其特征在于:该鉴定方法以枇杷S-RNase基因型Si作为分子标记,其序列如SEQ ID NO.1所示;以Si分子标记引物:正向引物序列如SEQ ID NO.2;反向引物序列如SEQ ID NO.3所示,进行筛选,AS-PCR扩增不同枇杷品种DNA,可扩增出830bp的扩增片段,标志着枇杷S-RNase基因型Si的存在,说明该枇杷品种为自交亲和品种。
4.权利要求3所述的枇杷自交亲和品种快速鉴定方法,其特征在于:25μL AS-PCR扩增反应体系中含有10×PCR buffer 2.5±0.25μL,2.5mmol·L-1的dNTPs2.0±0.2μL,2.5mmol·L-1的MgCl22.0±0.2μL,1U Tap DNA聚合酶1±0.1μL,5pmol·μL-1的AS-PCR上、下游引物1±0.1μL。
5.权利要求3所述的枇杷自交亲和品种快速鉴定方法,其特征是:扩增热循环参数为:94℃预变性2min,然后94℃变性15s,55℃退火30s,70℃延伸2min,共30个循环,最后70℃延伸7min。
6.权利要求3所述的枇杷自交亲和品种快速鉴定方法,其特征是:标记引物扩增产物经2%的琼脂糖凝胶电泳检测。
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