[发明专利]一种诱导肝星状细胞凋亡的蓝莓酒泥提取物及其制备工艺和应用

说明书

一、技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种诱导肝星状细胞凋亡的蓝莓酒泥提取物及其制备工艺和应用。

二、背景技术

肝纤维化是危害人类健康的重要疾病之一，迄今为止，仍然没有满意的治疗方法。现代医学认为，肝星状细胞(hepatic stellate cell，HSC)的激活增殖是形成肝纤维化的关键，抑制HSC的激活对肝纤维化的防治意义重大。肝星状细胞系HSC-T6为SV40转染SD大鼠HSC，其表型活化，可以表达I型胶原、Ⅲ型胶原及与肝纤维化相关的多种信号分子，是研究药物抗肝纤维化效果的最广泛应用的细胞模型。目前，通过食物抑制HSC的活化、增殖，促进其凋亡，从而达到预防和治疗肝纤维化的良好效果已引起国内外学者的广泛关注。

蓝莓又名越橘、蓝浆果，属杜鹃花科越橘属，是21世纪功能性保健浆果，被联合国粮农组织(FAO)列为人类五大健康食品之一，具有很高的经济价值和开发前景。蓝莓富含花青素、黄烷醇、酚酸、维生素C等生物活性物质，营养保健功能极高。其中花青素含量在各类蔬菜水果中排名最高，是迄今为止所发现的最有效的天然水溶性自由基清除剂。采用蓝莓汁酿造的蓝莓酒颜色鲜亮、果香浓郁、醇香纯正、风味独特，口味绵长，能最大限度地保留天然蓝莓的营养成分和保健功能因子，长期饮用具有美容养颜、抗氧化、抗炎、抗衰老、保护视网膜、保护心血管、延缓衰老、抗癌、增强免疫力等多种药理保健功效，在国内外市场非常畅销。但是对蓝莓酒酿造过程中产生的副产物蓝莓酒渣、酒泥的研究与开发利用却鲜有报道。

蓝莓酒泥是指蓝莓酒在渣液分离后、陈酿过程中产生的沉淀，富含酵母多糖、活性蛋白、蓝莓多酚、花色苷、SOD等活性因子，具有很强的生物保健功能。但是目前80％的蓝莓酒泥是直接排放，造成了严重的环境污染和资源的极度浪费，只有20％的用来发酵成饲料或肥料，其产生的社会、经济效益与其自身可以达到的实际效益相距甚远。因此，高效、经济、高活性的蓝莓酒泥提取物的制备及其在诱导肝星状细胞中的应用，不仅可以为具有防治肝纤维化功能食品的开发提供理论依据，实现蓝莓酒泥的高值化利用，还有利于阐明具有抗氧化活性的植物提取物在逆转肝纤维化进程的作用机理，具有广阔的市场前景。

中国专利(申请号CN201210317022.1，公开号CN103665922A)公开了“一种花青素≥25％的蓝莓提取物的生产工艺”，采用高压电场提取，反渗透装置浓缩制备蓝莓提取物；

中国专利(申请号CN201110151594.2，公开号CN102321062A)公开了“一种蓝莓酒渣中花青素分离、纯化及检验方法”是采用温浸提取制备蓝莓酒渣花青素。

中国专利(申请号CN201310262284.7，公开号CN103289430A)公开了“一种从蓝莓渣中提取纯化花青素的方法”采用酶解辅助提取法提取蓝莓渣中的花青素。

江得源等报道了采用蜗牛酶、纤维素酶、溶壁酶、几丁质酶破壁转化废菌体制备甲壳低聚糖的研究(江得源,吕梦圆,石佳仙,等.酶法破壁转化废菌体制备甲壳低聚糖.湖北农业科学,2014,53(10):2404-2407)。

刘露等报道了响应面法优化超声波辅助提取山药低聚糖的工艺研究(刘露,张雁,张名位,等.响应面法优化超声波辅助提取山药低聚糖的工艺研究.广东农业科学,2014,41(11):100-105)。

但是迄今为止，尚无关于在酶法辅助提取的过程中同时进行超声处理制备既富含蓝莓花色苷又富含功能低聚糖的蓝莓酒泥提取物的文献报道，更没有关于蓝莓酒泥提取物抑制肝星状细胞增殖、诱导肝星状细胞凋亡的文献报道。而本发明在酶法辅助提取的过程中进行超声处理，有利于使酶的活性位点在超声波的空化作用下与底物充分结合，与单独采用超声辅助提取或单独使用酶法辅助提取相比，提取率有了极大的提高，且操作简单、经济实用，具有很大的市场应用价值。

三、发明内容

发明目的

本发明的目的在于提供一种蓝莓酒泥提取物及其制备工艺，该蓝莓酒泥提取物的主要组分包括花色苷和功能性低聚糖，具有很强的生物保健功能。

本发明的目的还在于提供一种蓝莓酒泥提取物作为防治肝纤维化的保健食品原料新用途，即蓝莓酒泥提取物在诱导肝星状细胞凋亡中的应用。

技术方案

本发明通过如下技术方案实现：

一种诱导肝星状细胞凋亡的蓝莓酒泥提取物及其制备工艺，包括如下步骤：

(1)蓝莓酒泥3000rmp/min离心脱汁20min，取沉淀于45℃～50℃烘箱中烘干至水分含量≤2％，用高速粉碎机粉碎后过80目筛，得蓝莓酒泥干粉；