[发明专利]一种产软骨素的重组枯草芽孢杆菌及其应用

权利要求书

1.一种产软骨素的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，是在枯草芽孢杆菌中表达UDP-N-乙酰氨基葡糖C4异构酶和软骨素合成酶，构建枯草芽孢杆菌代谢合成软骨素的途径；所述枯草芽孢杆菌为Bacillus subtilis 168；所述UDP-GlcNAc C4异构酶和软骨素合成酶分别由KfoA和KfoC基因编码，KfoA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，KfoC的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；编码UDP-GlcNAc C4异构酶和软骨素合成酶的基因重组整合在基因组上进行诱导表达，启动子为木糖诱导型启动子Pxly；还分别表达了UDP-N-乙酰氨基葡糖或UDP-葡糖醛酸的合成途径的基因，调控软骨素的合成；所述UDP-N-乙酰氨基葡糖的合成途径包括编码UDP-N-乙酰氨基葡糖焦磷酸化酶的基因glmU，编码变位酶的基因glmM；所述UDP-葡糖醛酸的合成途径包括编码UDP-葡萄糖脱氢酶的基因tuaD，编码UDP-葡萄糖焦磷酸化酶的基因gtaB；编码所述UDP-葡萄糖脱氢酶的基因tuaD、尿苷二磷酸-葡萄糖焦磷酸化酶的基因gtaB、磷酸葡萄糖变位酶的基因glmM和UDP-N-乙酰氨基葡糖焦磷酸化酶的基因glmU的核苷酸序列分别为SEQ ID NO.3-6所示；所述分别表达了UDP-N-乙酰氨基葡糖或UDP-葡糖醛酸的合成途径的基因，包括以pP43NMK为表达载体表达基因glmU，或glmU及glmM，或tuaD，或tuaD及gtaB。

2.权利要求1所述重组枯草芽孢杆菌在生产软骨素和硫酸软骨素中的应用方法。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述重组枯草芽孢杆菌是以pP43NMK为表达载体表达编码UDP-N-乙酰氨基葡糖焦磷酸化酶的基因glmU，或glmU及编码变位酶的基因glmM；并在基因组上以木糖诱导型强启动子Pxyl整合串联表达编码UDP-N-乙酰氨基葡糖C4异构酶和软骨素合成酶的基因。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述重组枯草芽孢杆菌是以pP43NMK为表达载体表达编码UDP-葡萄糖脱氢酶的基因tuaD，或tuaD及编码UDP-葡萄糖焦磷酸化酶的基因gtaB，并在基因组上以木糖诱导型强启动子Pxyl整合串联表达编码UDP-N-乙酰氨基葡糖C4异构酶和软骨素合成酶的基因。