[发明专利]一种用于检测肺孢子虫的引物、探针和试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测肺孢子虫的引物和探针，其特征在于，所述引物和探针包括：用于检测肺孢子虫的正向引物、用于检测肺孢子虫的反向引物和用于检测肺孢子虫的探针，其中，

所述用于检测肺孢子虫的正向引物如序列表中SEQ ID NO.1所示；

所述用于检测肺孢子虫的反向引物如序列表中SEQ ID NO.2所示；

所述用于检测肺孢子虫的探针如序列表中SEQ ID NO.3所示；

所述探针的5’端连接有荧光基团FAM、HEX、TET、JOE、VIC、ROX、Cy3或Cy5，所述探针的3’端连接有淬灭基团TAMRA、Eclipse、BHQ1、BHQ2、BHQ3或DABCYL。

2.一种用于检测肺孢子虫的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1所述的引物和探针。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：核酸释放剂、PCR反应液、临界阳性质控品、阳性质控品、阴性质控品和工作标准品。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述核酸释放剂包括无菌水、终浓度为0.03-0.3％的聚乙二醇辛基苯基醚、终浓度为0.04-0.4％的壬基酚聚氧乙烯(40)醚和pH值为8.3的终浓度为0.01-0.1M的三(羟甲基)氨基甲烷。

5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液各组分在PCR扩增反应体系中包括：终浓度为0.01U/μL～0.05U/μL的Taq酶、终浓度为0.2～0.6mM的dNTPs、10×PCR缓冲液和终浓度为1.5～5.0mM的含Mg离子的溶液。

6.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述临界阳性质控品包括含浓度为1.0×10⁴拷贝/mL的肺孢子虫基因片段的溶液。

7.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述正向引物和所述反向引物的终浓度均为0.05-0.9μM，所述探针的终浓度为0.05-0.9μM。

8.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述工作标准品包括：工作标准品1、工作标准品2、工作标准品3和工作标准品4，其中，

所述工作标准品1为含有1.0×10⁷拷贝/mL的肺孢子虫基因的非传染性DNA片段；

所述工作标准品2为含有1.0×10⁶拷贝/mL的肺孢子虫基因的非传染性DNA片段；

所述工作标准品3为含有1.0×10⁵拷贝/mL的肺孢子虫基因的非传染性DNA片段；

所述工作标准品4为含有1.0×10⁴拷贝/mL的肺孢子虫基因的非传染性DNA片段。

9.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性质控品包括含浓度为1.0×10⁶拷贝/mL的肺孢子虫基因片段的溶液。

10.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述阴性质控品为浓度0.8％生理盐水。