[发明专利]一种治疗HPV16和HPV18病毒的融合蛋白及其制备方法

说明书

技术领域

本发明公开了一种融合蛋白，具体地说，是一种治疗HPV 16和HPV 18病毒的融合蛋白，本发明该公开了该融合蛋白的制备方法，属于生物医药技术领域。 

背景技术

99％以上的宫颈癌是由人乳头状瘤病毒(HPV)引起。人乳头状瘤病毒(HPV)的持续感染是妇女患宫颈癌的主要原因。在118种HPV亚型中，共有14种高风险的HPV病毒株被认为是造成宫颈癌及其癌前病变的高风险HPV亚型，其中两种病毒株风险最高HPV 16和HPV 18，可导致70％-85％的宫颈癌病例。开发出针对HPV 16和HPV 18两个型别的治疗药物对预防宫颈癌的发生有着重要意义。 

TALE蛋白N端和C端分别是核定位信号(Nuclear loca lizat ion signal，NLS)和转录激活结构域(Activation domain，AD)，而中部则是介导其与DNA特异识别与结合的重复单位(或称重复单元)构成，重复单位的部分由长度为33～35个氨基酸残基的，在每个重复单位中，+12和+13位的氨基酸残基是实现靶向识别特异DNA碱基的关键位点，随靶点核苷酸序列的不同而异，被称作重复可变双残基(Repeat variable di-residue，RVD)。不同的RVD能够相对特异地分别识别A、T、C、G 4种碱基中的一种。ScPvuII限制性内切酶是一种常见的限制性核酸内切酶，特异的识别CAGCTG位点。 

发明内容

针对上述不足，本发明的目的在于提供一种制备方法简单，用于HPV 16和 HPV 18病毒的融合蛋白及其制备方法。 

为解决上述技术问题，本发明提供的第一个技术方案是这样的：该治疗HPV16和HPV 18病毒的融合蛋白，所述的融合蛋白TALEs-ScPvuII-HPV18基因序列如SEQ ID NO：1所示；所述的融合蛋白TALEs-ScPvuII-HPV16_1-3的基因序列如SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示。 

进一步的，上述的治疗HPV 16和HPV 18病毒的融合蛋白，所述的融合蛋白依次由下述方法制得： 

1)靶位点的筛选 

以HPV16的E6基因和E7基因，HPV18的E7基因为靶基因，TALEs识别的位点加上限制性内切酶ScPvuII的识别位点构成TALEs-ScPvuII的靶位点； 

其中： 

HPV18的E7基因上的靶基因TALEs-ScPvuII-HPV18的靶位点为： 

TCAGCAGACGACCTTCGAGCATTCCAGCAGCTG； 

HPV16的E6和E7基因TALEs-ScPvuII-HPV16的靶位点为： 

TCAAGAACACGTAGAGAAACCCAGCTG， 

TAGGTGTATCTCCATGCATGATTACAGCTG， 

TGGGCTCTGTCCGGTTCTGCTTGTCCAGCTG。 

2)PET16b-TALEs-ScPvuII-HPV18和PET16b-TALEs-ScPvuII-HPV16_1-3原核表达载体的构建 

将TALEs-ScPvuII-HPV18和TALEs-ScPvuII-HPV16_1-3克隆到原核表达载体PET-16b的NdeI和BamHI位点，获得TALEs-ScPvuI I-HPV18和 

TALEs-ScPvuII-HPV16_1-3原核表达载体，最后同时转化到大肠杆菌BL21中； 

3)TALEs-ScPvuI I-HPV18和TALEs-ScPvuII-HPV16_1-3蛋白的表达与纯化 

将带有重组质粒TALEs-ScPvuII-HPV18和TALEs-ScPvuI I-HPV16_1-3的大肠杆菌BL21菌种扩大培养，在12-18℃经IPTG过夜诱导，分别收集所得到的