[发明专利]一种治疗HPV16和HPV18病毒的融合蛋白及其制备方法

权利要求书

1.一种治疗HPV 16和HPV 18病毒的融合蛋白，其特征在于，所述的融合蛋白TALEs-ScPvuII-HPV18基因序列如SEQ ID NO：1所示；所述的融合蛋白TALEs-ScPvuII-HPV16_1-3的基因序列如SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示。

2.根据权利要求1所述的治疗HPV 16和HPV 18病毒的融合蛋白，其特征在于，所述的融合蛋白依次由下述方法制得：

1)靶位点的筛选

以HPV16的E6基因和E7基因，HPV18的E7基因为靶基因，TALEs识别的位点加上限制性内切酶ScPvuII的识别位点构成TALEs-ScPvuII的靶位点；

其中：

HPV18的E7基因上的靶基因TALEs-ScPvuII-HPV18的靶位点为：TCAGCAGACGACCTTCGAGCATTCCAGCAGCTG；

HPV16的E6和E7基因TALEs-ScPvuII-HPV16的靶位点为：

TCAAGAACACGTAGAGAAACCCAGCTG，

TAGGTGTATCTCCATGCATGATTACAGCTG，

TGGGCTCTGTCCGGTTCTGCTTGTCCAGCTG；

2)PET16b-TALEs-ScPvuII-HPV18和PET16b-TALEs-ScPvuII-HPV16_1-3原核表达载体的构建

将TALEs-ScPvuII-HPV18和TALEs-ScPvuII-HPV16_1-3克隆到原核表达载体PET-16b的NdeI和BamHI位点，获得TALEs-ScPvuII-HPV18和TALEs-ScPvuII-HPV16_1-3原核表达载体，最后同时转化到大肠杆菌BL21中；

3)TALEs-ScPvuII-HPV18和TALEs-ScPvuII-HPV16_1-3蛋白的表达与纯化

将带有重组质粒TALEs-ScPvuII-HPV18和TALEs-ScPvuII-HPV16_1-3的大肠杆菌BL21菌种扩大培养，在12-18℃经IPTG过夜诱导，分别收集所得到的TALEs-ScPvuII-HPV18和TALEs-ScPvuII-HPV16_1-3蛋白菌体，经过高压破碎后离心获得可溶性的上清，进行Ni柱亲和层析，待目的蛋白与Ni柱结合之后，先用漂洗液洗涤，再用洗脱缓冲液，利用脱盐柱将洗脱组分中的高盐缓冲液置换成含有20％甘油的PBS溶液，最后进行SDS-PAGE的检测，即为纯化的TALEs-ScPvuII-HPV18和TALEs-ScPvuII-HPV16_1-3蛋白。