[发明专利]雪莲干细胞的分离培养方法及在制备抗衰老产品中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及植物干细胞在抗衰老产品的应用，尤其涉及雪莲干细胞的分离培养方法及在制备抗衰老产品中的应用。

背景技术

干细胞是一种尚未分化发育的种子细胞，具有无限自我更新复制和分化潜能，这是干细胞用于美容产品的基础。干细胞美容技术及其相关产品近两年受到美容界专家及业内人士的广泛关注。所有的干细胞，不论它们的来源(植物、动物或者人类)均含有特别的表观遗传因子以及丰富的营养物质，这些物质是维持干细胞的自我更新能力。

植物干细胞技术是以植物的伤口复原机制为基础，先令植物形成伤口从而诱导复原组织细胞的形成，复原组织包含了未分化的细胞即干细胞，将这些复原组织细胞收集起来并在培养液中培养，培养液中蕴含了果糖、微量元素以及植物荷尔蒙，继而放置于生物反应系统进行大规模生产。

雪莲是菊科毛凤菊属多肉植物，为菊科多年生草本植物。雪莲内含有丰富的细胞，尤其是干细胞。此外，由于其生在在海拔5000米的山中，那里空气稀薄同时要饱受最强的紫外线和辐射的侵袭，因此其干细胞可以从根本上解决人类普遍存在的衰老问题。

有相关报告和专利称，将动植物干细胞活性成分添加到化妆品中能起到一定的抗皱效果，然而，真正来源于动植物干细胞的活性物由于产率低导致原料价格非常昂贵，从而限制了它的使用。此外，现今市场上干细胞产品多来自于动物性胎盘素或动物性干细胞，它们与人体细胞成分接近，从而可以用于抗衰老等功效。然后，动物源性干细胞的使用在许多国家存在争议，不仅存在安全隐患，同时具有诸多人道方面的限制。而植物干细胞苏日安大都具有全能性，具备干细胞的特点，然而其与人体的同源性较多，因此植物干细胞提取物具备的功能目前还不是十分清楚，阻碍了相应的应用。

发明内容

目前苹果干细胞已被首次应用到化妆品中，而对于雪莲干细胞的研究目前并未报道，所以本发明首次从雪莲复原组织中提取分离较高生理活性的植物干细胞，并进行大规模生产；将其制成冻干粉，以一定的比例添加至抗衰老美容产品中。

本发明目的通过以下技术方案来实现：

一种雪莲干细胞的分离培养方法，其特征在于，取天山雪莲幼嫩叶片，对其消毒后首先利用固体培养基分离天山雪莲干细胞，再利用液体培养基对其进行传代配养；所述固体培养基含有无机盐、维生素、氨基酸、生长素、糖类和活性炭；液体培养基含有无机盐、维生素、氨基酸、生长素、糖类和添加物。

优选包括以下步骤：

(1)取雪莲幼嫩叶片，清洗、消毒；

(2)将消毒后的雪莲叶片接种至固体培养基上；所述固体培养基含有无机盐、维生素、氨基酸、生长素、糖类、活性炭和琼脂；培养温度为25-29℃，pH值为6.0-6.5，培养时间为20-25天，得到来源于形成层的雪莲干细胞；

(3)将来源于形成层的雪莲干细胞转移至液态培养基中培养，所述液体培养基含有无机盐、维生素、氨基酸、生长素、糖类和添加物。

在步骤(2)所述接种之前，先将消毒后雪莲幼嫩叶片切成约0.5cm*0.5cm大小，接种时，使叶背面与培养基接触，每瓶1片；

步骤(2)所述无机盐为硝酸钾、硫酸镁、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、氯化钙、碘化钾、氯化钴、磷酸二氢钠或硼酸中的一种以上；各物质的含量为：硝酸钾2450-2500mg/L，硫酸镁122-124mg/L，硫酸锰11-13mg/L，硫酸锌2.0-3.0mg/L，硫酸铜0.03-0.05mg/L，氯化钙112-114mg/L，碘化钾0.7-0.75mg/L，氯化钴0.024-0.026mg/L，磷酸二氢钠132-135mg/L，硼酸2.8-3.0mg/L；

维生素为肌醇、硫胺类、烟酸、L-抗坏血酸或柠檬酸中的一种以上；各物质的含量为：肌醇210-230mg/L，硫胺类19-21mg/L，烟酸1.6-2.2mg/L，L-抗坏血酸52-55mg/L，柠檬酸75-85mg/L；

氨基酸为L-天冬氨酸、L精氨酸、甘氨酸或脯氨酸中的一种以上；各物质的含量为：L-天冬氨酸135-145mg/L，L精氨酸160-180mg/L，甘氨酸78-85mg/L，脯氨酸118-126mg/L；

生长素为α-萘乙酸，含量为1.8-3.0mg/L；

糖类为蔗糖或果糖，含量为10.0-12.0mg/L；

活性炭的含量为450-550mg/L；

琼脂的含量为3.6-3.8mg/L；

步骤(3)所述无机盐为硝酸钾、硫酸镁、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、氯化钙、碘化钾、氯化钴、磷酸二氢钠或硼酸中的一种以上；