[发明专利]雪莲干细胞的分离培养方法及在制备抗衰老产品中的应用

权利要求书

1.一种雪莲干细胞的分离培养方法，其特征在于，取天山雪莲幼嫩叶片，对其消毒后首先利用固体培养基分离天山雪莲干细胞，再利用液体培养基对其进行传代配养；所述固体培养基含有无机盐、维生素、氨基酸、生长素、糖类和活性炭；液体培养基含有无机盐、维生素、氨基酸、生长素、糖类和添加物。

2.根据权利要求1所述的分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取雪莲幼嫩叶片，清洗、消毒；

(2)将消毒后的雪莲叶片接种至固体培养基上；所述固体培养基含有无机盐、维生素、氨基酸、生长素、糖类、活性炭和琼脂；培养温度为25-29℃，pH值为6.0-6.5，培养时间为20-25天，得到来源于形成层的雪莲干细胞；

(3)将来源于形成层的雪莲干细胞转移至液态培养基中培养，所述液体培养基含有无机盐、维生素、氨基酸、生长素、糖类和添加物。

3.根据权利要求2所述的分离培养方法，其特征在于，在步骤(2)所述接种之前，先将消毒后雪莲幼嫩叶片切成约0.5cm*0.5cm大小，接种时，使叶背面与培养基接触，每瓶1片；

步骤(2)所述无机盐为硝酸钾、硫酸镁、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、氯化钙、碘化钾、氯化钴、磷酸二氢钠或硼酸中的一种以上；各物质的含量为：硝酸钾2450-2500mg/L，硫酸镁122-124mg/L，硫酸锰11-13mg/L，硫酸锌2.0-3.0mg/L，硫酸铜0.03-0.05mg/L，氯化钙112-114mg/L，碘化钾0.7-0.75mg/L，氯化钴0.024-0.026mg/L，磷酸二氢钠132-135mg/L，硼酸2.8-3.0mg/L；

维生素为肌醇、硫胺类、烟酸、L-抗坏血酸或柠檬酸中的一种以上；各物质的含量为：肌醇210-230mg/L，硫胺类19-21mg/L，烟酸1.6-2.2mg/L，L-抗坏血酸52-55mg/L，柠檬酸75-85mg/L；

氨基酸为L-天冬氨酸、L精氨酸、甘氨酸或脯氨酸中的一种以上；各物质的含量为：L-天冬氨酸135-145mg/L，L精氨酸160-180mg/L，甘氨酸78-85mg/L，脯氨酸118-126mg/L；

生长素为α-萘乙酸，含量为1.8-3.0mg/L；

糖类为蔗糖或果糖，含量为10.0-12.0mg/L；

活性炭的含量为450-550mg/L；

琼脂的含量为3.6-3.8mg/L；

步骤(3)所述无机盐为硝酸钾、硫酸镁、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、氯化钙、碘化钾、氯化钴、磷酸二氢钠或硼酸中的一种以上；

各物质的含量为：硝酸钾992-996mg/L，硫酸镁180-184mg/L，硫酸锰22-26mg/L，硫酸锌10-12mg/L，硫酸铜0.3-0.5mg/L，氯化钙72-76mg/L，碘化钾0.3-0.6mg/L，氯化钴0.03-0.036mg/L，磷酸二氢钠126-131mg/L，硼酸2.0-2.5mg/L；

维生素为肌醇、硫胺类、烟酸、L-抗坏血酸或柠檬酸中的一种以上；各物质含量为：肌醇194-220mg/L，硫胺类20-23mg/L，烟酸3-5mg/L，L-抗坏血酸57-62mg/L，柠檬酸75-83mg/L；

氨基酸为L-天冬氨酸、L精氨酸、甘氨酸或脯氨酸中的一种以上；各物质的含量为：L-天冬氨酸136-142mg/L，L精氨酸172-180mg/L，甘氨酸75.0-85.0mg/L，脯氨酸110.0-115.0mg/L；

生长素为α-萘乙酸，含量为3.0-5.0mg/L；

糖类为蔗糖或果糖，含量为32.0-34.0mg/L；

添加物为麦饭石颗粒和硒矿石颗粒，麦饭石颗粒60.0-80.0mg/L，硒矿石颗粒60.0-80.0mg/L。

4.利用权利要求1或2的分离培养方法制备雪莲干细胞提取物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将权利要求1或2所述的分离培养方法获得的雪莲干细胞放大培养；

(2)过滤培养液，将截留的细胞系培养物取出，冷冻、破碎后，过滤，将滤液浓缩即得雪莲干细胞提取物。