[发明专利]电化学发光检测外周血循环肿瘤细胞抗原的方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及外周血中循环肿瘤细胞抗原电化学发光免疫检测方法及试剂盒。

背景技术

在全球范围内，乳腺癌是女性群体中最常见的恶性肿瘤，在所有病例中，约有20-30%为“最凶险的乳腺癌”——HER2阳性乳腺癌。相对于其他类型的乳腺癌，HER2阳性乳腺癌的疾病进展速度更快，恶性程度更高，更容易复发和转移，预后也较差。

中国的乳腺癌的发病率呈逐年上升趋势，尤其在京、津、沪等大城市，乳腺癌已位居女性恶性肿瘤发病率之首。根据乳腺癌的生物学特性，可以把其分成4～5个分子亚群，不同的亚群有不同的预后和治疗策略。现代医学已经进入了乳腺癌分类治疗的时代，搞清患者的分子类型是正确治疗的前提，在所有乳腺癌患者中，属于HER2基因过表达者占20%-30%，和其他亚群乳腺癌相比，该类型乳腺癌患者更容易出现复发和转移。如果只接受常规综合治疗，HER2阳性乳腺癌患者的生存时间仅为HER2阴性患者的一半；相反，如果能及早确定HER2状态，及早采用针对性治疗，与普通乳腺癌患者相比，HER2阳性患者的生存机会就会接近HER2阴性患者。

自从1987年Slamon等发现了HER2在人类乳腺癌发病机制中的作用，而经典的抗HER2靶向治疗药物曲妥珠单抗自1998年经美国FDA批准用于临床以来也已应用了10余年，认为乳腺癌HER2状态是乳腺癌患者重要的预后因子和靶向药物疗效的预测因子。大量研究数据和临床实践已使大家在抗HER2治疗作用机制和临床疗效等方面达成一定的共识。而目前临床上检测HER2状态都是基于患者原发灶或者转移灶组织的检测，而这些检测往往会受到肿瘤组织（取材、固定和保存等操作不当）、检测方法、肿瘤异质性或变异等影响，造成患者的HER2状态无法确定，特别是一些复发转移性患者，以往肿瘤组织保存时间较长或者转移灶无法活检获取组织等情况，更无法在治疗过程中对患者进行动态的监测。针对HER-2阳性乳腺癌患者的靶向治疗，目前的临床指南是：① HER2阳性乳腺癌术后辅助治疗建议使用赫赛汀靶向治疗一年为标准治疗；② 进展期HER-2阳性乳腺癌建议赫赛汀使用至少一年，并推荐使用直至进展，甚至，在靶向维持治疗进展后仍可继续赫赛汀靶向治疗基础上更换新的化疗。

从HER-2阳性乳腺癌患者的生物学特征和靶向治疗的疗效，只有尽早、准确进行HER2状态的检测，才能对患者进行复发风险度准确评估和采取正确的针对性治疗（赫赛汀等靶向药物）。传统对石蜡包埋组织采用常规免疫组化法和FISH（原位荧光杂交）方法对组织标本制作和保存有较高的要求，因此，一旦这些手术或者活检组织标本不能满足检测要求，患者的HER-2状态就无法确定，肿瘤分子分型和分类治疗就无法进行，临床上屡见这类患者，如标本保存时间太长、术前化疗前标本留取太少、以往的检测方法不标准、反复检测HER-2属于临界状态、患者复发转移与原肿瘤生物学行为不符但转移灶无法重新活检等，临床上无法鉴定患者真正的HER-2状态；HER-2靶向药物赫赛汀本身相当昂贵，还有潜在的心脏毒性，这使得临床医生在患者使用靶向治疗的决策上左右为难、难以取舍。此外，除了客观有效率的评价之外， HER-2阳性乳腺癌患者接受靶向治疗期间处于稳定或者完全缓解情况下，目前临床上还无法对其进行进一步的动态疗效检测，循环肿瘤标记物和循环肿瘤细胞（CTC）检测只能在一定程度上发挥作用，但并非真正反映体内HER-2阳性乳腺癌细胞的动态变化和疗效。